斑马鱼Cyp19A2基因5′调控序列的分析研究和Cyp2J1基因的表达及初步功能研究.pdfVIP

斑马鱼c印』州2箍㈥5’．训捧序列的分析卅f究和oP2，』的表达鼓初步功能斜究 斑马鱼C功J姐2基因5’一调控序列的分析研究 摘 要 别在生殖腺和脑部特异表达，其编码产物P450芳香酶能够参与鱼体内的雌激素 合成，催化雄激素转变为雌激素，因此在斑马鱼性激素分泌和性器官发育过程中 都起到非常重要的渊节作用。目前关于两个芳香酶基因的特异表达调控机制的研 究报道极少，仅限于生物信息学方面的分析。在本论文中，我们克隆了斑马鱼 c妒J朔2基因的5’调控序列，并初步进行了功能分析。通过～系列的内部引物， (一2600～-1 bp)、pEGFP—cF_aR(一1700～一1 pEGFP—cF-dR(一1700，、。一700bp)、pEGFP—aF—cR【-2600～-1700 (一2600～．2200 bp)和pEGFP．dPaR(一700～一1bp)等7个载体，分别显微注射 至斑马鱼1～2细胞期的受精卵，追踪观察报告基因的时空表达情况，分析调控 括问脑和中脑部位，以及由脑部向躯干延伸的部分神经细胞和表层细胞有EGFP 集中在卵黄囊表层细胞表达，未出现脑部特异表达；其余4个表达载体的注射胚 bp调 控序列全长与组织特异表达密切相关；2)转录起始位点上游．1700 bp和．700bp 是该基因的启动活性区域，能驱动EGFP基因的非特异表达，一700bp是启动表 达所需的最短序列：3)与@印姒2基因特异表达相关的调控元件极有可能位于 ．2600～一1700bD区域内。 关键词：斑马鱼，o哪蚴2，5’一调控序列，组织特异性 中图分类号：Q34 斑马鱼0p7蚋2堪…5’一训控序列的分析卅}究干¨op2，J的表达及丰JJ步功能研究 斑马鱼铆刀J基因的表达及初步功能研究 摘 要 细胞色素P450 动物体内的花生四烯酸代谢反应，在许多外源及内源的同醇类物质氧化还原反应 中起重要作用。然而在斑马鱼中，至今未见有关于该皿家族基因表达及功能研究 的报道。本文中，我们克隆了斑马鱼的c阳枷基因，进行了生物信息学分析， 检测了斑马鱼胚胎及成体组织中c归2订的表达情况，同时进行了仰2盯的过 表达研究。结果如下：1)斑马鱼Cp甜】基因全长1600bp，编码496个氨基酸 似的生物催化活性；2)原位杂交结果显示z∥驴2，J主要集中在成鱼的脑，包括 端脑外围区、腹面间脑区和下丘脑区以及生殖腺，包括卵巢中处于I期和11期发 育阶段的卵黄颗粒沉积前卵母细胞和精巢中靠近精小叶边缘的部分精原细胞中 表达，但在斑马鱼早期胚胎中没有检测到抑2仃的原位杂交信号；3)半定量 生殖腺，以及心脏、肝脏、肾脏和肌肉等组织，同时36hpf的斑马鱼胚胎中也能 发育，造成胚胎近尾部的体节弯曲，围心腔膨大，心血管发育异常并伴有发育迟 滞现象。提示：1)彻肌很可能参与斑马鱼性腺发育相关激素的分泌，并调 控生殖细胞的发育；2)枷2姐在胚胎阶段的表达量尽管很低，但己足够维持 斑马鱼早期的正常发育，过表达后，会对早期胚胎的发育造成影响。 关键词：斑马鱼，互够炉2，J，原位杂交，过表达，脑，生殖腺，性激素分泌，牛 殖腺发育 中图分类号：Q34 2 5 斑马鱼c印』蚴2犟H7一洲控序列的分析研究和c印2“的表选及初步功能研究 ofthe of in AnaIysis5’-regulatoryregionC妇j942 Abstract and aretwozebrafish P450 in