过氧化氢含量(H2O2)试剂盒使用说明.pdfVIP

过氧化氢含量 （H2O2）试剂盒使用说明 微量法 注意：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定 货号：BC3595 规格：100 管/96 样 试剂的组成和配制： 试剂一：丙酮 100mL×1 瓶，4℃保存；（自备） 试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前加入 3mL 浓盐酸充分溶解备用。用不完的 试剂 4℃保 存；(溶解时间较长，约 30min，务必提前准备) 试剂三：液体 10mL×1 瓶，4℃保存； 试剂四：液体 30mL×1 瓶，4℃保存； 产品说明： H2O2 是生物体内最常见的活性氧分子，主要由 SOD 和 XOD 等催化产生，由 CAT 和 POD等催化降解。H2O2 不仅是重要的活性氧之一，也是活性氧相互转化的枢纽。一方面， H2O2可以直接或间接地氧化细胞内核酸，蛋白质等生物大分子，并使细胞膜遭受损害，从 而加速细胞的衰老和解体；另一方面 H2O2 也是许多氧化应急反应中的关键调节因子。 H2O2 与硫酸钛生成黄色的过氧化钛复合物，在 415nm 有特征吸收。 需自备的仪器和用品： 可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、丙 酮 100mL、浓盐酸 5mL、研钵和冰。 操作步骤： 一、 H2O2 提取： 1. 细菌或细胞样品的制备：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细 菌或细胞数量 （10 个）：试剂一体积 （mL）为 500~1000：1 的比例 （建议 500 万细4 菌或细胞加入 1mL试剂一），超声波破碎细菌或细胞 （冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30次）；用试剂一定容至 1mL；8000g 4℃离心 10min，取上清， 置冰上待测。 2. 组织样品的制备：按照组织质量 （g）：试剂一体积(mL)为 1：5~10 的比例 （建 议称取约0.1g 组织，加入 1mL 试剂一）进行冰浴匀浆；转移至 EP 管中，用试剂一 定容至 1mL，8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。 3. 血清 （浆）样品：直接检测。 二、 测定步骤 1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 415nm，蒸馏水调零。 2、 将试剂二、三和四 37℃ （哺乳动物）或 25℃ （其它物种）水浴 10min 以上。 3、在 EP 管中按顺序加入下列试剂 试剂名称 （μ） 测定 对照 L 样本 250 试剂一 250 试剂二 25 25 试剂三 50 50 4000g，25℃离心10min，弃上清，留沉淀 试剂四 250 250 加入试剂四溶解沉淀后，室温静置 5min，取 200μL 转移至微量石英比色皿或 96 孔 板中测定415nm 处吸光值 A。对照管只要做一次即可。计算 ΔA＝A 测定-A