碱性磷酸酶的分离纯化-袁野20101009.pptVIP

碱性磷酸酶(AKP)的分离纯化 有机溶剂沉淀 概念：在含有溶质的水溶液中加入一定量亲水的有机溶剂，降低溶质的溶解度，使其沉淀析出。 原理： （1）降低了溶质的介电常数，使溶质之间的静电引力增加，从而出现聚集现象，导致沉淀。 （2）由于有机溶剂的水合作用，降低了自由水的浓度，降低了亲水溶质表面水化层的厚度，降低了亲水性，导致脱水凝聚。 常用的有机溶剂沉析剂 乙醇：沉析作用强，挥发性适中，无毒常用于蛋白质、核酸、多糖等生物大分子的沉析； 丙酮：沉析作用更强，用量省，但毒性大，应用范围不广； 特点： 介电常数小: 60%乙醇的介电常数是48 丙酮的介电常数是22 容易获取 有机溶剂沉析的特点 分辨率高； 溶剂容易分离，并可回收使用； 产品洁净； 容易使蛋白质等生物大分子失活； 应注意在低温下操作； 影响有机溶剂沉析的主要因素 温度：低温有利于防止溶质变性；有利于提高收率（溶解度下降）； 搅拌速度：散热 溶液pH值：原则是避免目标蛋白与杂质带有相反的电荷，防止共沉现象。（pI） 离子强度:离子强度低有利于沉析，0.01~0.05mol/L 样品浓度: 0.5~2% 稀：溶剂用量大，回收率低，但共沉淀作用小 浓：节省溶剂用量，共沉作用强，分辨率低 金属离子的助沉析作用：Zn2+、Ca2+ 1.称取兔肝2g,剪碎后置于玻璃匀浆器中，加入0.01 M的醋酸镁及醋酸钠混合液4m