第八章染色试卷.ppt

三、染色时应注意事项 一张优质的HE染色切片，绝非仅指染色而言，它包括很多方面，首先应重视“固定”环节，其次注意脱水、透明、组织浸蜡，包埋和切片等各个步骤。一张因固定、脱水等步骤有所缺陷的切片，染色是不可能鲜艳、透明、层次分明的。解决上述各细节问题的方法已在前面各章节中均提到过。但在进行HE染色时还应注意以下问题： 1．组织切片的脱蜡步骤应彻底，否则无论进行那种染色都会发生困难。脱蜡时间要充分，若溶蜡剂使用过久应及时更换以免效率降低，若室温过低，可将溶蜡剂置于温箱中进行脱蜡。 2．苏木素染液使用一段时间后表面易出现亮晶状飘浮物，这可能是液体表面的过氧化物，必须过滤除去，以防沉渣污染组织切片。苏木素液一般染过三、四百张切片后，着色力会减弱，着色不鲜艳，呈灰蓝色时应及时更换新液。 3．染色的时间长短需依据：染剂对组织的染色作用，室温条件，切片厚薄，固定液的类别，染液的新旧而进行调节。所以在染色时必须使用显微镜观察染色程度以利掌握时间。 4．分化十分重要。分化步骤的准确也是染色成败的关键，若分化失当则必然引起染色不匀或过淡，过深等现象，因此分化后一定要镜检，观察胞核是否清晰，胞浆呈淡白色。否则需再次分化，不然一旦复染后，组织会呈紫蓝色即“蓝盖红”现象。 5．还原液不宜过浓，若碱性太强易使组织脱落故以淡为宜。 6．伊红宜淡染，复染过深胞核会不清晰，影响镜检。 7．若脱水，透明等步骤不够彻底，则组织表面会有一层雾状膜。若有这一现象，应立即更换纯酒精脱水，再次透明。在潮湿的季节里应注意酒精的浓度、若降低要及时更换。 8．染色后的组织切片、要将组织四周的污染物痕迹擦掉，以免影响美观。 9．封固剂要适量，滴加时应小心倾滴，盖玻片要轻轻放置，以免气泡产生影响镜检。盖玻片大小选择要合适， 一般要大于组织块，以防封盖不全，盖玻片要放正，标签贴牢，编号清楚。从而保证切片的封藏和美观。 10．染好的切片应妥为保存，更应避免日光照射，否则切片容易褪色。 （二）冰冻切片的快速染色方法： ①?切片固定30秒－1分钟。 ②?水洗。 ③?染苏木素3－5分钟。 ④?分化。 ⑤?于碱水中返蓝20秒。 ⑥?伊红染色10－20秒。 ⑦?脱水，透明，中性树胶封固。 冰冻组织1－2分钟，切片1分钟，固定1分钟，染色共五分钟。总共在10分钟内完成快速制片过程。 常规方法： （1）冰冻切片固定?? 10～30 s （2）稍水洗?????????? 1～2 s （3）苏木精液染色（60℃）?30～60 s （4）流水洗去苏木精液?????5～10 s （5）1%盐酸乙醇? ?????????1～3 s （6）稍水洗??????????? ? 1～2 s （7）促蓝液返蓝?????????? 5～10 s （8）流水冲洗?????? ??????15～30 s （9）0.5%伊红液染色???????30～60 s （10）蒸馏水稍洗??????????1～2 s （11）85%乙醇?????????????1～2 s （12）95%乙醇???????????? 1～2 s （13）无水乙醇????????? 1～2 s （14）石炭酸二甲苯??????? 2～3 s （15）二甲苯（Ⅰ） ???????2～3 s （16）二甲苯（Ⅱ）????????2～3 s （17）中性树胶封固。 注：第（14）步如果不用石炭酸二甲苯，可改用无水乙醇，染色结果为：细胞核蓝色、胞质、肌纤维、胶原纤维和红细胞呈深浅不一的红色。 课后习题： 1.简述HE染色的步骤。 2.染色的目的是什么？ 3.染色的基本原理是什么？ 人有了知识，就会具备各种分析能力， 明辨是非的能力。 所以我们要勤恳读书，广泛阅读， 古人说“书中自有黄金屋。 ”通过阅读科技书籍，我们能丰富知识， 培养逻辑思维能力； 通过阅读文学作品，我们能提高文学鉴赏水平， 培养文学情趣； 通过阅读报刊，我们能增长见识，扩大自己的知识面。 有许多书籍还能培养我们的道德情操， 给我们巨大的精神力量， 鼓舞我们前进。 * 第八章 染 色 一、染色的目的 任何冰冻切片、石蜡切片等如果不经过染色，在显微镜下只能看到细胞及其它组织成分的轮廓，即使由于组织内部各种物质的折射指数不同，从光线的明暗上能观察到一些组织结构，但也是极其简单有限的。远不能满足观察和借以诊断的目的。  染色的目的：将染料配制成溶液，将组织切片浸入染色剂内，经过一定的时间，使组织或细胞及其他异常的成分被染上不同深浅的颜色，产生不同的折射率，便于在光学显微镜下进行观察。因此，染色在组织形态学，特别是病理形态诊断、科研和教学工作中，都具有非常重要的意义和实用价值。 二、染色的原理 染色就是染色剂和组织细胞相结合的过程。有