基因结构与功能汇总.ppt

分子生物学第二部分 分子生物学研究的方法策略与技术支持 任课教师：肖尚英 基础医学院医学 生物化学与分子生物学研究所 第七章 基因结构与表达分析的基本方法 本章内容简介： 序列分析； 核酸杂交； 体外扩增； 核酸测定（存在分析——有无、多少）； 第一节 DNA序列分析Nucleic Acid Sequence Analysis 核苷酸序列测定最早始于20世纪60年代，即Sanger和Brownlee等建立的RNA序列测定技术。 真正意义上的DNA序列分析方法，是在具有极高分辨率的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide gel electrophoresis，PAGE)技术的基础上建立并发展起来的。通过电泳可以分离长度达300～500个碱基，而差别仅1个碱基的同系单链核苷酸序列。 70年代初，Sanger建立了第一种直接测定DNA序列的方法——加减法，并用该法测定了ΦX174噬菌体DNA的全长5375个核苷酸序列。1977年Sanger又建立了更为简便、精确的“双脱氧核苷酸末端终止法”(dideoxynucleotide chain termination method)测定DNA序列。这种方法迄今仍然是绝大多数实验室中最常用的DNA序列分析方法。 几乎在同一时期，Maxam和Gilbert于1977