分解纤维素的微生物的分离.pptVIP

一、基础知识 1.纤维素 纤维素是一种由葡萄糖首尾相连而成的高分子化合物，是含量最丰富的多糖类物质。 土壤中某些微生物能够产生纤维素酶,把纤维素分解为葡萄糖，后再利用。 2.纤维素酶 纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶，前两种酶使纤维素分解成纤维二糖，第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。 纤维二糖 C1酶、Cx酶 葡萄糖苷酶 葡萄糖 纤维素 一、基础知识 在2支20mL的试管中，分别放入1×6cm的滤纸条，再分别加入pH为4.8、物质的量浓度为0.1mol/L的醋酸-醋酸钠缓冲液10mL、11mL。在加入10mL缓冲液的试管中加入1mL纤维素酶（70~80U/mL）。将二支试管固定在50mL的锥形瓶中，在摇床上以140r/min的转速振荡反应1h，观察结果。 1U表示1个酶活力单位，是指在温度为25℃，其他反应条件，如pH等，均为最适的情况下，在1min内转化1mmol的底物所需的酶量。 底物：酶所作用和催化的化合物。 在一支试管中添加纤维素酶， 另一支试管不添加纤维素酶； 〖思考1〗实验分析：P27的小实验是如何构成对照的？ 滤纸崩溃法 （2）纤维素分解菌的筛选 1、筛选纤维素分解菌的方法______________。该方法可以通过________反应直接筛选。 刚果红染色法 颜色 2、其原理是：刚果红可以与纤维素形成____________，当纤维素被_________分解后， 红色复合物无法形成，出现以_____________ 为中心的________，可以通过___________________________ 来筛选纤维素分解菌。 红色复合物 纤维素酶 纤维素分解菌 透明圈 是否产生透明圈 可根据是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌 练一练： 1.下列关于纤维素酶的说法，错误的是 A. 纤维素酶是一种复合酶，至少包括三种 B. 纤维素酶可把纤维素分解成葡萄糖 C. 纤维素酶可用于去掉植物的细胞壁 D. 葡萄糖苷酶可把纤维素分解成葡萄糖 2.利用刚果红法可以筛选出纤维素分解菌，下列说法错误的是 A. 刚果红能与纤维素形成红色复合物 B. 刚果红能与纤维二糖形成红色复合物 C. 刚果红不能与葡萄糖形成红色复合物 D. 若培养基上产生了透明圈，则说明已筛　选出了纤维素分解菌 (三)、实验设计 土壤取样 选择培养 梯度稀释 将样品涂布到鉴别培养基 挑选菌落 1、纤维素分解菌选择培养基属于______（固体、液体）培养基，原因是__________ 【资料二】选择培养 阅读资料二“选择培养基”，回答以下几问题： 液体 没有添加琼脂 2、该培养基对微生物_____（具有，不具有）选择作用。如果具有，其选择机制是 ____________________________________________________________________________ 具有 以纤维素粉为唯一碳源，能分解纤维素的微生物可以大量繁殖； 若设置一个对照实验说明选择培养的作用，应控制的变量是将__________改为_________。 3、你能否设计一个对照实验，说明选择培养基的作用？ 葡萄糖 纤维素粉 【资料三】刚果红染色法 方法一：先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应 方法二：在倒平板时就加入刚果红 培养基组成 提供的主要营养物质 CMC-Na 5~10g 碳源 酵母膏 1g 碳源、氮源、生长因子 KH2PO4 0.25g 无机盐 土豆汁 100mL 碳源、生长因子 琼脂 15g 凝固剂 上述物质溶解后，加蒸馏水定容至1000mL 氢元素、氧元素 鉴别纤维素分解菌的培养基 (水溶性羧甲基纤维素钠) 染色法 优点 缺点 方法一 方法二 颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用 操作繁琐，刚果红会使菌落之间发生混杂 操作简便，不存在菌落混杂问题 产生淀粉酶的微生物也产生模糊透明圈，有些微生物能降解色素，形成明显的透明圈。 思考：这两种方法各有哪些优点与不足 挑选产生透明圈的菌落 挑取产生明显的透明圈的菌落，一般即为分解纤维素的菌落。 接种到纤维素分解菌的选择培养基上，在300C－ 370C培养，可获得纯培养。 四、结果分析与评价 1.培养基的制作是否合格以及选择培养基是否筛选出菌落 对照的培养基在培养过程中没有菌落生长则说明培养基制作合格。 如果观察到产生透明圈的菌落，则说明可能获得了分解纤维素的微生物。