高多糖含量植物——莲DNA的提取方法.pdf

维普资讯 · 8 · 福建稻麦科技 2004年 3月 (Mar．2003) 高多糖含量植物——莲 DNA的提取方法* 王经源，郭明亮，林文雄一 吴锦忠 (福建农林大学生命科学学院农业生态研究所。福建福州3sooo2) (福建中医学院药学系 。福建福州35OOO1} 摘 要：提出一种适用于莲等高多糖含量植物叶片组织的DNA提取方法。用CrAB—free缓冲液对叶片组织匀浆洗涤后再进行 DNA提取，可有效克服多糖等次生代谢物质对提取的干扰，所得 DNA的分子量达 49kb，0o2∞／OD№比值为1．87±0、06，产率为 230--320pg／(g·鲜重)，可用于RAPD分析。 关键词：莲 ；DNA提取；RAPD 中图分类号：(2949 文献标识码 ：A 文章编号：1008—9799(2004)01一oo08—02 DNApreparationmethodforlotus(NelumbonuciferaGaertn．)， containghightp0lysaccharide WangJing一 ， IVgng—liang，LinWen—Mong (AgreeolcgicalInstitutec／0SchoolofLifeScience，FujianAgricultureandForestryUniversity，Fuzhou350002) WuJin——~aortg (PhammcyDepartment0fFujianCollegeofTraditional(1aineseMedicine，Fuzhou350001) Abstract：AnM ofEtqApreparationforlotus(NehunbonuciferaGaerm．)，whichisrichinl~lysaccharide、ⅣaSintroducedinthispaper．Inthis me 。d，∞ eliminatethecontaminationbyl~lysaccharide，theleafp。^derw washde withCIAB—fleebufferprior∞EtqAextraction．Ihemolec． 山 Weight0fisolatedDNAWaS49kb，andthe0D260／∞ 280ofEtqA吣 1．87±0．06．hteproductinorateofhteseEtqA咄 230--320 (g · 矗eshleaves)．hteEtqAxar~ssuitableforRAPDanalysis． Keywords：Nehm~ n 迁盯a：DNA preparatino；RAPD 莲 (NelumbonuciferaGaertn．)是一种古老的 DNA提取方法，如 SDS法、CTABE J法等，均无 植物，是被子植物中起源较早的植物之一，在我 法从莲 叶中提得可用于 DNA分子标记分析 的 国有悠久的栽培历史 J。其植株的多种器官均可 I)NA。经过反复的摸索和借鉴前人的经验，笔者 入药，如种子、胚、胚乳、子房、叶片等，具有 提出了一种可以克服多糖和多酚类物质干扰的提 重要的药用价值。经过长期的人工繁育，现已经 取方法，获得了可以用于RAPD、ISSR等分子标 形成 了籽莲、花莲和藕莲三大品系，种质资源相 记分析的DNA。 当丰富。运用分子标记对这些种质资源进行鉴别、 1 材料 整理和亲缘关系分析是深化开展莲的栽培和育种 供试材料建吉莲和太空莲 3号取 自福建省建 研究工作 的基础，也是进行莲籽 GAP研 究的基 瓯市吉阳镇福建地道药材莲子 GAP栽培示范基 础。而获得高质量的基因组DNA是进行分子标记 地，切取莲未完全展开的箭状幼叶，置于 自封 口 研究工作的前提。但 由于莲的