分光光度计测量误差来源浅析.pdf

分光光度计测量误差来源浅析 　　 1仪器本身性能带来的误差 　　 1.1复色光对比耳定律的偏离 　　 比耳定律成立的前提条件是人射光是单色光，但是精度再高的仪器 ，即使是双单色器的分光光度计，也只能获得近乎单色的光，无法 获得纯单色光，它仍然含有狭窄光通带，具有复色光的性质。而复 色光会导致比耳定律的正或负偏离。固定狭缝的紫外分光光度计光 谱带宽一般为 1nm或2nm ，可调狭缝的可以做到0.Inm;可见分光光 度计带宽6nm、snm ，甚至十几纳米。光谱带宽应该是越小越好， 但是随着光谱分辨率的提高，仪器的灵敏度降低，所以选择仪器时 要综合考虑各种条件的影响。当溶液浓度较小且单色光较纯时，可 近似认为符合比耳定律。 　　 1.2杂散光的影响 　　 杂散光是指进人检测器的处于待测波长光谱带宽范围外的其他波长 组分，它是光谱测量中误差的主要来源。产生原因有:分光光度计的 色散元件、反射镜、透镜及单色器内壁灰尘等。在分光光度计工作 波段边缘波长处，由于单色器透光率、光源辐射强度、检测器灵敏 度都较低，杂散光的影响更为显著。杂散光限制仪器的分析上限可 引起严重的测量误差，实际工作中，在定量分析时，一般在吸收峰 或其附近处测量样品吸光度，如果在分析波长处含有杂散光，这时 样品的透光率较小，而杂散光大部分透过，使测量吸光度低于真实 吸光度。 　　 1.3仪器噪声对测t的影响 　　 仪器噪声也是仪器的一个重要指标，它表征仪器做稀溶液的能力。 是叠加在待测量的分析信号中的不需要的信号，扫描 100%T和0%T线 ，可观察到分光光度计的绝对噪声水平，如果仪器噪声较大，会掩 盖较小的测量信号，一般用噪音的二倍来表示仪器的灵敏度。 　　 1.4波长和吸光度准确度 　　 样品的每一个值都是在一定的波长下测得的，如果波长误差很大， 测出的值肯定不准。吸光度准确度也是用户对仪器的直接要求，更 应引起足够的重视。国家计量检定规程规定双光束紫外可见分光光 度计透射比准确度为A级士0.6% ， B级土 1.0%。 　　2测量条件的选择 　　2.1参比溶液和溶荆的选择 　　 分光光度计的测量实际上是以通过参比池的光强度作为人射光强度 来测定试样的吸光度，先调节仪器使透过参比池溶液的吸光度为零 ，然后让同一束光通过样品，使得吸光度比较真实地反映待测物质 的浓度，所以参比溶液的选择非常重要。如果仅有待测物质与显色 剂的反应产物有吸收，可用纯溶剂或蒸馏水作参比溶液。如果显色 剂有颜色，并在测定波长下有吸收，则用显色剂溶液作参比溶液， 所加人显色剂及其它试剂的量，与试样中的加入量应一致。如果样 品中其它组分本身的颜色对测定有干扰，而所用显色剂没颜色，则 用不加显色剂的样品溶液作参比液。 　　 正确选择合适的溶剂，对提高分析的准确度起重要作用。为减小溶 剂中杂质的影响，应选择高纯度的溶剂;溶剂应不与待测物质发生化 学反应;待测物在溶剂中要有一定的溶解度;在测定的波长范围内，溶 剂本身没有吸收，注意常用溶剂的最短可用波长;当用挥发性大的溶 剂时，测量过程中吸收池应加盖。 　　2.2测试波长的选择 　　 当用分光光度计对溶液进行测定时，首先需要选择合适的测量波长 。选择的依据是该被测溶液的吸收曲线。在一般情况下，我们总是 选择最大吸收波长作为测量波长，这样可以提高灵敏度。而在有些 情况下最大吸收峰很尖锐、吸收过大或附近有干扰存在，就不能选 最大吸收波长，而必须在保证有一定灵敏度的情况下，选择吸收曲 线中的其它波长进行测定(曲线较平坦处对应的波长) ，以消除干扰 。绘制吸收曲线是正确选择波长的有效手段和方法。 此文章由广州深华生物技术有限公司编辑修改。 微信红包群| 支付宝红包群号 / 09AgLc3u9Rbb