实验二细胞的制片与观察和细胞大小的测量 - 生命科学学院生物学实验 .ppt

实验一 细胞的制片与观察和细胞大小的测量 [目的要求] 1、学习掌握涂片法制作动物细胞显微玻片标本。 2、学习掌握线粒体活体染色法和显示细胞内DNA和RNA的方法。 3、学习掌握测量细胞大小的基本方法。 4、了解动物细胞的基本结构。 实验一 细胞的制片与观察和细胞大小的测量 [实验原理] 1、线粒体活体染色法 线粒体内膜和嵴膜含有细胞色素氧化酶系统，用詹纳斯绿B对线粒体进行专一性活体染色时，线粒体内的细胞色素氧化酶可使詹纳斯绿B染料始终处于氧化态而呈蓝色，而线粒体周围细胞质中的詹纳斯绿B被还原呈无色。 2、细胞内DNA和RNA的显示 核酸均为酸性，对碱性染料派诺宁和甲基绿具有亲和力。用这两种染料混合液处理细胞时，由于DNA和RNA聚合程度不同，甲基绿分子有两个相对的正电荷，与聚合程度较高的DNA分子有较强的亲和力，可使DNA分子染成蓝绿色，而派诺宁分子中仅一个正电荷，可与低聚分子RNA结合使其染成红色。这样细胞中的DNA和RNA便被区别开来。 实验一 细胞的制片与观察和细胞大小的测量 3、细胞大小的测量 镜台测微尺(台尺)是中央部分刻有精确等分线的载玻片，一般是将1mm等分为100格，每格长10μm，专用于校正目镜测微尺(目尺)每格的相对长度。目尺是一块可放在目镜内隔板上的圆形小玻片，其中央有精确的等分刻度，有等分为50小格和100小格两种，用以测量经显微镜放大后的细胞物像。 实验一 细胞的制片与观察和细胞大小的测量 [材料用品] 人口腔粘膜细胞、大鼠、鸡血涂片标本、显微镜、镜台测微尺、目镜测微尺、无菌牙签、解剖器具、染色缸、染色架、载玻片、盖玻片、滴管、吸水纸、0.9％生理盐水、0.1％碘液、0.02％詹纳斯绿、醋酸洋红染液、甲基绿-派洛宁染液、卡渃氏固定液、丙酮、二甲苯、中性树胶、蒸馏水、水 实验一 细胞的制片与观察和细胞大小的测量 [实验内容] 1.制备口腔粘膜细胞标本，观察细胞形态结构和线粒体的活体染色显示。 2.细胞中DNA和RNA的显示。 3.利用显微镜测微技术测量鸡红细胞、草履虫及其细胞核直径，计算细胞核质比 。 实验一 细胞的制片与观察和细胞大小的测量 [操作要点] 1、涂片法制备人口腔黏膜上皮细胞玻片标本及观察 取材 用无菌牙签在口腔颊部轻轻刮取口腔黏膜细胞，勿将深部细胞刮下。 涂片 材料均匀分散，细胞不重叠，以易于观察。 加盖玻片 镊子夹住盖玻片的一侧，将另一侧首先接触载玻片和溶液，然后慢慢放下盖玻片，避免产生气泡。 2、口腔黏膜细胞活体染色显示线粒体 涂布口腔黏膜细胞后即刻染色，以保证活细胞染色。 实验一 细胞的制片与观察和细胞大小的测量 3、细胞内DNA和RNA的显示 材料尽可能新鲜。 涂片时，不宜将肝块切面在玻片同一处反复多次涂抹。 涂片后立即晃动玻片，使材料迅速风干后即刻固定，以尽可能保持细胞原有形态结构。 水洗时，水流细缓，以免将玻片上的材料冲掉。 分色时间必须掌握好，避免时间过长，色差消失，以致难以观察到DNA和RNA的分布。 二甲苯有毒，染色缸必须及时加盖。 本实验所用染料为碱性，应用中性树胶封片。 4、细胞大小的测量 当换用不同倍数的目镜或物镜时，目尺需重新校正。 测量细胞大小时所用目镜和物镜的倍数必须与校正目尺时所用目镜和物镜的倍数一致。 实验一 细胞的制片与观察和细胞大小的测量 [作业思考] 1、绘人口腔黏膜上皮细胞结构图，注明各部分(包括线粒体)名称。 2、根据实验结果判断，你的制片中口腔黏膜细胞是活细胞还是死细胞？为什么？ 3、将目镜测微尺校正结果填入表，为什么换用不同倍数目镜或物镜时，须重新校正目尺？ 涂片法制备口腔黏膜上皮细胞玻片标本 口腔黏膜细胞活体染色显示线粒体 细胞内DNA和RNA的显示 实验二 动物组织的制片及观察 [目的要求] 1、掌握动物组织平铺片、分离片等临时装片和涂片的一般制作方法。 2、掌握动物的四类基本组织结构特点，理解组织结构与功能的密切关系。 [实验原理] 采用一定的制片方法，将动物组织制备成玻片标本，在显微镜下观察动物组织的形态结构。 实验二 动物组织的制片及观察 [实验内容] （一）制片和观察 1、单层扁平上皮的制片和观察 2、骨骼肌的制片和观察 3、血液涂片标本的制备 （二）动物四大组织玻片标本观察、示范、多媒体演示 1、上皮组织 2、肌肉组织 3、神经组织 4、结缔组织 实验二 动物组织的制片及观察 [材料用品] 蝗虫浸制标本、动物各组织的玻片标本、显微镜、解剖器具、蜡盘、载玻片、盖玻片、烧杯、染色缸、大头针、棉花、0.65％生理盐水、1％硝酸银溶液、甘油、香柏油、0.1％亚甲基蓝、甲醇、吉姆萨染色液、蒸馏水、