DNA分子标记在花卉上的应用.pdfVIP

第 18 卷第2 期 齐齐2吉尔大李学报 VoL18 ,No.2 2αl2年6 另 1国茸雾 2002 3四n国lof Qiqß回r Unìver咀ty DNA 分子标记在花卉上的应用 玉金同1) !牟代弟2 (1.齐齐哈尔大学生命科学与工程学戳，齐齐稽尔 161嗣加6 ;2. 东或农业大学建艺学院，治尔槟 2坷。30) 攘要本文综述rDNA分子标记位常见类型，以及各类型的特点。着重指出 rDNA分子标记在花卉分类、育种、 组织培养、基因定位等方面的应用. 关锺询:花卉;DNA 分子标记，RFLP， RAPD 中窑分类号:0344 ， 4 文献标识码:A 文章捕号: I ∞7 锦4X(2(02)02αμ2-04 近十几年分子生物学得到了迅猛的发展，握之各种生物学技术也应运而生。分子标记是在人类基因级计 划(Human G军nome lnitíative. 简称HGI)的推动下，迅速发展和应后起来o DNA分子标记以其不受环境、 生物生长发育阶段、组织特异性等钓影响和快捷、简便等优点而被人们广泛采用。现在，DNA 分子标记技术 被国内外学者广泛用于生物的遗传育矜、种质资源部研究、基8定位、遗传部芳的构建等许多方面，这项技术 已经渗透到生物学的各个学科。 DNA 分子标记技术在花齐上也已经有一定程度的应用，现将其综述如下。 1 DNA 分子标记的模念及分类 DNA 分子标记是插在DNA分子水平上，通过一定方式或特殊手段来反殃生物个体之间或种群之间具 有差异性状钓DNA 片段。 DNA 分子标记依据其作用机理的不同分为两类: 类是以 PCI王技术为基础的分 子标记.另一类是以South世2 杂交为基础分子标记。 I. l 基于Sonthern 杂交技术的分子标记 限制性片段长度多态性(R自trìcti∞ Fragment Length Polymorphism , RFLP)是Grodzicker 于 1914 年 创立，它是建立在酶切片段分子杂交基磁上的肘。 l. 1. 1 RFLP 的原理及步草草 事童基的改变和染色体结构的变化导致生物个体或科群之向 DNA 片段酶切位点的变化，用限销性内切 酶切割改变的DNA则产生长短、种类、数吕不同的限量毒性片段。这些片段经聚再烯I!;胶凝胶电泳分离后，在 凝重置上呈现不同的带状分布，具有差异性的 DNA 片段可通过Southern 杂交检测出来。电泳所得到的 DNA 片段，对于分子量较小的可以经 EB 染色后室主要在紫外灯光下观察，若选择靶因可A. Jltl 将在挺跤上呈带状分 布的 DNA 通过 so咀出ern 转移到 NC膜或尼龙旗上，再利用探针进行Southern 杂交后，洗去多余探针，经放 射自显影即可得到靶DNA RFLP 主要步骤包括限制性内切董事切割、聚丙烯戮舷疑跤电泳、Southem 转移 o 和杂交、放射自显影。 1.1. 2 RFLP 的转，也 利用汉FLP 进行多在位分析具有许多优点，主要表现在二(1) RFLP 标记无表型效应. RFLP 标记的检 模不受环烧条件和发育阶段的影响: (2)RFLP 标记在等位之揭是共显性的，应此不受杂交方式的影响:(3) 在非等位的RFLP 标记之何不存在上位效应，因此互不干扰:(4)RFLP 标记源于基因组DNA 的自然变异， 在数量上几乎不受限制e 虽然有上述优点，但是也存在不足，如具有种属特异俭，在实际应用中受到限制:要 和i 备放射性探针和进行SoutÀern 转移及杂交、放射自显影，因丽费时、繁臻、污染大，对环镜和人体造成不良 影响:此外.对 DNA 含量与纬度要求高，多态位水平低，技术难度高，只适应单/低拷贝。 1.2 基于 PCR 技术的分子标记 聚台湾链式反应(Polymer自己α回lnr国.cti∞，简称PCR)一经问世，便以其德单、快速、高效等特点迅速成 为分子生物学研究的有利