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PCR相关资料 1、PCR实验技术【原理】 PCR（polymerase?chain?reaction）用于在体外将微量的目标DNA大量扩增，以便进行分析。反应体系：①样品DNA；②引物（primer），是人工合成的一对寡核苷酸链（约15-20个核苷酸），用于扩增夹在双引物与模板DNA互补区之间的区域；③4种dNTP；④Tag?DNA聚合酶，是从一种嗜热水生菌（Thermus?aquaticus）中分离出来的。此酶最适作用温度为75～80℃，但短时间在95℃下不失活。⑤适宜的缓冲体系和适量的Mg2+。反应过程：①变性：将反应液置于PCR仪中，提高温度（约90-95℃）使DNA双链解离；②复性：降温（约60℃左右）退火，使引物与模板结合；③延伸：升温度至70-75℃，在引物的引导下合成模板单链的互补链，从而形成DNA双链片段；④重复上述“变性——复性——延伸”的过程。最初几次循环中形成的长链DNA较多，但随着反应的进行，长链DNA以算术级数增加，而夹在两个引物之间的目标DNA以指数级数增长，经大约20—30次循环后，扩增产物中主要是目标DNA。 【材料】 1.?试剂和溶液? （1）10?×?PCR缓冲液 500?mM?氯化钾 100?mM?Tris-Cl?(室温时pH?8.3) 15?mM?氯化镁 （2）10?mM脱氧三磷酸核苷(dNTPs)?溶液－含有所有四种dNT