半枝莲黄酮化合物调控胃癌细胞Survivin、PTEN蛋白表达的实验研究.pdfVIP

王笠继；堂丝蕉篮酩丝金塑塑蕉复叠绁胞乳丛i!i卫：f：!曼奠堡自垂些的塞墅型[塞 ．!一 表达的实验研究 研究生：王笑娜 导师：l＼平教授 中文摘要 肿瘤血管生成与多种肿瘤的生长、转移、复发和预后密切相关，肿瘤血管生 成是一个多因素参与，多步骤复杂的过程，包括黏附、基质降解与移动，抑制其 中任何一个过程理论上均可抑制肿瘤的侵袭转移。因此，以肿瘤血管生成为靶点， 丌发血管生成抑制剂在抗肿瘤研究中是一个新的十分活跃的研究领域。其中，中 医中药具有取材简便，毒副作用少的特点，将众多研究者的目光吸引到天然药物 的研究上来。以天然药物为研究对象，来探讨和研究新型的抗肿瘤药物已逐渐成 为当今热点。本试验旨在研究并证明传统中药半枝莲黄酮类化合物的抗肿瘤活性， 继之课题组的前期研究结果：半枝莲活性成分抑制胃癌细胞VEGF表达，从肿瘤 瘤作用机制，为进一步开发高效低毒的抗肿瘤药物奠定理论基础。 我们采用系统溶剂分离法、硅胶柱层析法等方法，获得半枝莲不同极性的提取 物，以MTT比色试验及流式细胞术等技术为手段，从中筛选出抑制肿瘤细胞增殖 作用较强的成分。采用免疫细胞化学、Westernblot等方法，进一步研究其抑制肿 瘤生长、侵袭和转移的作用及其机理。 实验结果如下： 1、半枝莲黄酮化合物的提取与分离：硅胶柱层析法以氯仿一甲醇混合溶剂梯度洗 脱(10：0；100：1：100：2； H)，半枝莲抑制肿瘤细胞增殖有效成分的筛选：经M丁T法检测活性，选择活性强 的部位D。半枝莲黄酮化合物D不同浓度(10,ujml、20 的增埴，且呈较明显的浓度依赖性。 2、半枝莲黄酮化合物诱导肿瘤细胞的凋亡：随着药物浓度的增加，细胞凋亡率逐 免疫细胞化学法可见，随着药物浓度的增大及作用时间的延长，棕染逐渐变浅， 表明Survivin蛋白表达逐渐减少。60la120la g／mli g／m1半枝莲黄酮化合物作用 SGC一7901细胞、BGC一823细胞24 h后Survivin表达与空白对照组比较差异有统计 学意义(P0．01)；30la g／ml、60lag／ml、120lag／ml半枝莲黄酮化合物作用 SGC．7901细胞、BGC．823细胞48 h后Survivin的表达与空白对照组比较差异有 统计学意义(PO．01：60 ug／ml、 120u 度作用24h比较差异有统计学意义(尸0．01)。Westernblot可见，随着药物浓度的 增大及作用时间的延长，Survivin的表达条带颜色逐渐变浅，实验结果与免疫细胞 1．t u h 化学基本一致。40g／m1、80g／m1半枝莲黄酮化合物作用．SGC．790l细胞24 60p 后Survivin表达与空白对照组比较差异有统计学意义(尸O．05)；1g／ml半枝 莲黄酮化合物作用SGC-7901细胞24h后Survivin表达与空白对照组比较差异有 u la 统计学意义(户0．01)；80g／ml、160g／ml半枝莲黄酮化合物作用SGC．7901 细胞48 160u 组比较差异有统计学意义(尸O．05)； 免疫细胞化学法可见，随着药物浓度的增大及作用时间的延长，棕染逐渐变浅， la 表明Survivin蛋白表达逐渐减少。120g／ml半枝莲黄酮化合物作用SGC～7901细