赖氨酰氧化酶基因原核表达克隆的构建.PDF

31　4 　 2009 8 Journal of Ningxia Medical University ·421 · :1674-6309(2009)04-0421-02 ·· 1 2 3 1 摆　茹, 　杨　伟 , 　赵建宁, 　韩　梅 (1., 　750004;　2., 　750021;　3., 　750004) :目的　(hLOX), , hLOX 。方法　RNA, RT-PCR LOX (750bp), pET28a, DH5α。pET28a-hLOX 。结果　pET28a hLOX 。结 论　LOX 。 :;RT-PCR; :Q785　　　:A 　　(Lysyl oxidas , LOX) zol RNA。 RNA λ=260 nm λ= , 280 nm RNA , 1OD260=40μg RNA , RNA 。 cDNA , cDNA 。 , 、、 1.4 　PCR hLOX 　 G n Bank [1-2]。32KD hLOX (G n Bank NM_002317)pET28a , , EcoRⅠHind Ⅲ , , hLOX、 hLOX 。:: 。 5-CG GAATTC ATG GAC GAC CCT TAC AAC CCC T-3 1　 EcoRI ;:5-GCGC AAGCTT CTA 1.1　　、 ATA CGG TGA AAT TGT GC-3Hind III pET-28a, E.coil DH5ê, 。1st strand cDNA 。DMEM Gibco , , 750 bp。(GAPDH) , Difco RNA 。1% 。TRIZOL Gibco ,TaKaRa On St p RNA , 750bp PCRKit (AMV)、EcoRI、Hind III 、、 , PCR 。 、DNA mark r TaKaRa 。 1.5　　 1.2 　　 10%/ hLOX pET28a EcoRⅠHind Ⅲ4 (100U/mL)/(100U/mL)DMEM , h, 。 , 37℃、5%CO 。 T DNA ligas E.coil DH5α。 2 4 , RNA 。 PCR, , 。 1.3　RNA cDNA 　Tri- 。DNA star G n Bank hLOX (G n Bank NM_ :2009-04-09 002317), 、 :, :NZ0772; 。pET28a-hLOX。 (2005) 2　 : (1979- ), , ,, , 2.1　hLOX RT-PCR 。 　　RT-PCR 750bp, :, , 。 E-mail: 500 bp, 1。 hanm i0708 @ ·422 · 31 　　 R