第16章细胞因子与粘附因子检测.pptVIP

* 基因水平：PCR技术。 检测水平 生物活性测定 蛋白水平 免疫学测定 第二节 临床常用的测定方法 掌握 齐齐哈尔医学院免疫 生物活性测定：测活性。灵敏 性高,特异性低 蛋白水平 ELISA 免疫学测定 化学发光酶免疫试验 （ 含量） 流式细胞术 酶联免疫斑点试验 第二节 临床常用的测定方法 掌握 齐齐哈尔医学院免疫 一、酶联免疫吸附试验 （一）基本方法 1.直接法---双抗体夹心法 （测CK最常用方法） 2.间接法 3.抗原竞争法 齐齐哈尔医学院免疫 熟悉 敏感性偏低 不能区分细胞因子的生物学活性 （二）方法学评价 特异、简便 成本低、易于推广和标准化等优点 可同时检测大量标本且试验废弃物便于处理 细胞因子测定的首选方法 缺点 优点 齐齐哈尔医学院免疫 了解 二、化学发光酶免疫试验 是以发光剂作为酶免疫测定的底物，通过发光反应增强测定的灵敏度。 （一）基本方法 双抗体夹心法 （二）方法学评价 特异性好、灵敏度高、线性范围宽、试剂稳定、可自动化检测 齐齐哈尔医学院免疫 了解 三、流式细胞术 （flow cytometry, FCM) 分离和培养待检细胞 细胞破膜与固定 封闭非特异性结合位点 染色与分析 基本方法 了解 方法学评价 优点：特异、高效、灵敏. 应用: 对单个细胞水平CK或AM检测； 检测细胞内CK；膜上AM、CK受体 　　同一细胞内两种以上细胞因子表达 齐齐哈尔医学院免疫 熟悉 四、酶联免疫斑点试验(ELISPOT) 包被有待测细胞因子抗体的微孔板 分泌相应细胞因子的待测细胞 有或无刺激物培养 细胞因子被板上的特异性抗体捕获 后续的反应如同ELISA 一个斑点代表一个细胞因子分泌细胞，斑点的颜色深浅程度与细胞分泌的细胞因子量相关 基 本 原 理 + 了解 齐齐哈尔医学院免疫 方法学评价 比常规ELISA法的灵敏度提高200倍 应用：检测分泌特定细胞因子的细胞 熟悉 五、免疫学测定方法学评价 优点： 特异性高 操作简便、快速，无需依赖细胞株 影响因素较少且易控制，重复性好，方法容易标准化。 缺点： 所测定含量，与其生物活性不一定呈正比 结果与所用的抗体来源及亲和力有很大的关系 敏感性相对较低 标本中可溶性受体，会影响特异性抗体对细胞因子结合 熟悉 第三节 细胞因子与黏附分子 测定的临床应用 1.特定疾病的辅助诊断 2.机体免疫状态的评估 3.临床疾病治疗效果的监测和指导用药 4.疾病预防的应用 熟悉 一、临床应用原则 方法选择和结果判断作出综合考虑: 异质性 功能交叉性和多样性 来源的复杂性 组织细胞的非特异性 细胞因子和粘附分子 全身免疫或炎症状态——血浆、血清 炎症局部细胞因子的水平——局部分泌液 细胞分泌细胞因子的特性——外周单个核细胞 细胞表面细胞因子受体或黏附分子定位检测 疾病疗效观察和预后判断 1.标本的适当选取 敏感性高-------特异性低，废弃物难处理 活性测定-------不能精确蛋白定量 基因分析-------操作繁琐，有助于疾病分析 多种方法—综合分析—正确评价 2.方法的联合应用 意义： 细胞因子具有网络状调节的特点 级联效应或相互抑制作用的网络系统 有助于提供有效的疾病诊断和机体免疫状态信息 举例： 免疫细胞分泌：IL-1、 IL-2、IFN-γ和GM-CSF Th1/Th2细胞平衡状态：IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ 3.细胞因子的联合检测 二、特定疾病的辅助诊断 （一）细胞因子与疾病 1.细胞因子风暴—IL-1、IL-2、IL-6、IFN-γ等 引发全身炎症反应综合征 2.变态反应性疾病—哮喘IL-4促进IgE合成 3.自身免疫病—类风湿性关节炎（TNF-α、 IL-1、IL-6、IL-8、MCP-1） （一）细胞因子与疾病 4.免疫缺陷病—IL-2Rγ基因缺陷（重症联合免疫缺陷病）；IL-6（浆细胞瘤、膀胱癌） 5.器官移植排斥反应—TNF-α、IL-1、 IL-2、IL-6、IFN-γ水平升高 6.恶性