脂氧素A4通过抑制Jurkat T细胞钙池操纵的钙通道电流而抑制其激活和增殖.pdfVIP

脂氧素A4通过抑制Jurkat T细胞钙池操纵的钙通道电流而抑制其激活和增殖.pdf

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脂氧素A4通过抑制Jurkat T细胞钙池操纵的钙通道电流而抑制其激活和增殖.pdf

主 丝生 芏塑鱼蕉堂盘圭 Q 生! 旦笠 !卷筮 塑 Chin J Microbio1 Inmaunol,December 2O07,Vnl 27,No.12 . 基础免疫学. 脂氧素A4通过抑制Jurkat T细胞钙池操纵的 钙通道电流而抑制其激活和增殖 熊维 李天 张临洪 张力 吴萍 周晓燕 李咏生 叶笃筠 【摘要 】 目的 通过研究脂氧素 (LX~)对JurkatT细胞内游离钙离子浓度变化、钙池操纵的 钙通道电流(I )及细胞激活和增殖的影响,初步探讨其对T细胞的调节作用及机制。方法 钙离子 荧光探针Fluo-3/AM负载细胞后,用激光共聚焦扫描显微镜技术动态检测活细胞内游离钙离子浓度 的变化;全细胞膜片钳技术记录Is0c;EIJSA测IL-2水平; H-TdR掺入法测细胞增殖情况,并结合流式 细胞仪进行细胞周期分析。结果 (1)用含钙细胞外液时,LX~降低正常Jurkat T细胞内游离钙离子 浓度,而用无钙细胞外液时则无显著差异;(2)LX 呈剂量依赖性抑制钙池操纵的钙通道(SOC)激活 剂thapsigargin(TG)引起Jurkat T细胞内游离钙浓度的增高,100 nmol/L LX 也能抑制anti.CD3或植物 血凝素(PHA)引起的细胞内钙离子浓度的增高,SOC阻滞剂2-aminoethoxydiphenylborate(2-APB)能显著 抑制TG引起的钙内流;(3)膜片钳结果显示,LX~抑制正常Jurkat T细胞I ,TG能显著增大I ,而 LX~呈剂量依赖性抑制TG引起的Is0c的升高;(4)LX~剂量依赖性抑制anti.CD3和anti.CD28诱导的 JurkatT细胞IL-2表达及细胞增殖,细胞周期分析发现LX~阻止JurkatT细胞由GI期进入S期,降低 S期细胞比例。结论 LX~可能通过抑制Jurkat T细胞 引起的胞质内游离钙离子浓度的升高而 抑制其激活和增殖。 【关键词】脂氧素 ;JurkatT细胞;钙池操纵的钙通道;膜片钳;细胞激活和增殖 Lipoxin inhibits Jurkat T cell activation and proliferation by blocking calcimn entry current Is0c XIONG We ,LI Tian,ZHANG l_in-hong,ZHANG , ,ZHOU Xiao-yan,LI~ -sheng,YE Du- . Department ofNeurology.the Central Hospital of Wuhan,Wuhan 430014,China Corresponding cIl D,:YE Du-yun,Ema//:x/ongwxw@163.co/T/, 【Abstract】 Objective To stuay the effects of LX on T cells and its mechanism through investigating the effects oflipoxin (D )on the changes of intracellular free calcium concentration,store-operated calcium channels current(Isoc),activation and proliferation in Jurkat T cells.Methods After incubated with nuo.3/AM, laser confocal scanning microscopy was used to dynamically monitor the changes of intraeellular calcium ooncentra— tion.Whole-cell patch clamptechniquewas employedtoinvestigatetheinfluence of onIsoc. Ihe concentra— tions ofIL-2 were determined by E . H-TdR incorporation was used for detecting Jurkat T cell proliferation. and cell cycle prog

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