细胞工程室功能.PPT

学习汇报 汇报人：曹龄之 一、学习地点： 国家免疫生物制品工程技术研究中心（以下简称中心） 重庆原伦生物科技有限公司与中国人民解放军第三军医大学联合实验室（图片1、2） 二、中心简介： 1、成功研制出世界首个口服重组幽门螺杆菌疫苗； 2、目前正在研发: MRSA、Ab（鲍曼不动杆菌）、龋齿疫苗 三、中心队伍组成 教研室老师 原伦公司工作人员 实习生、硕士生、 博士生 四、中心实验室组成 基因工程室、细胞工程实验室、蛋白质工程实验室、发酵工程实验室、实验动物室、质检分析室、准备室 （一）、基因工程室 功能： 开展分子生物学相关实验内容，包括核酸与质粒的提取、基因的获得与分离、克隆载体与表达载体的重组、基因的表达等 主要的仪器设备： PCR仪、核酸电泳仪、凝胶成像分析系统、紫外分光光度计、恒温震荡器、超速/高速离心机、冷冻离心机、恒温培养箱、恒温摇床、厌氧培养箱、超净工作台（一般和厌氧）、超声波细胞粉碎机、纯水仪、微波炉、天平等 （二）、细胞工程室 功能： 主要开展免疫学、细胞培养与检测，包括ELISA和细胞培养、冻存、复苏、相关免疫因子的检测 主要仪器设备： CO??培养箱、细胞计数仪、流式细胞仪、酶标仪、水平离心机、洗板机、半干转移仪、细胞发酵罐、液氮罐 （三）蛋白质工程实验室与冷室 功能：主要开展蛋白质初提、分离纯化等蛋白质相关内容，包括破碎细胞、固液分离、蛋白质变性与复性、柱层析、超滤等 主要仪器设备： 大容量离心机、高压均质机、蛋白纯化工作站、蛋白电泳仪、干胶仪、纯水仪等 (四)发酵工程实验室 功能： 主要包括培养基的制备、菌株的传代与保种、工程菌大规模培养等 主要仪器设备： 超净工作台、三气培养箱、普通显微镜、生物反应器 （五）实验动物室 功能： 开展实验动物的繁殖、喂养、提供实验动物 主要仪器设备： ICR小鼠、动物麻醉剂、超净工作台等 (六)质检分析室 功能： 主要开展mircoRNA和质量检测相关实验技术内容，包括RNA提取检测、荧光定量分析、免疫印迹、蛋白纯度分析等 主要仪器设备： 凝胶成像分析（蛋白）系统、PCR仪、杂交炉、电转仪、全波长酶标仪、HPLC、制备液相色谱仪、荧光显微镜、渗透压摩尔浓度测定仪等 （七）实验准备室 功能： 主要开展实验物品的回收、清洗，负责无菌物品的供应。 仪器： 干燥箱、制冰机、灭菌锅等 五、上游实验步骤 选取一个/多个目的 基因，并设计、制 作引物（primer、 oligo） 从细菌中提取全 基因组，即模板 （天根，-20℃保 存） 提取质粒， 酶切，（天 根，4℃保 存备用） PCR及 产物电泳 PCR产物回收 （OMEGA） 连接、转化 培养、表达 PCR及产物电泳 设备器材：PCR仪、 PCR管或EP管、移液器及枪头、小型离心机、电泳设备、凝胶成像系统 PCR体系的组成： 模板、dNTP、5xbuffer、DNA聚合酶（Taq多聚酶/primer star）、引物、ddH2O 体系的选择 材料：PCR试剂、琼脂糖粉、1xTAE、EB、溴酚蓝 PCR及产物电泳 PCR条件：预变性 变性 退火 最终延伸 延 伸 凝胶电泳：胶浓度1%-2%； 电泳条件及时间：100-200v,时间据条件不同而不同，一般以1/2胶为准。 返回