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菊花的组织培养 富顺一中 潘家强 由于菊花的病毒病种类比较多，而且危害也较为严重。使用扦插繁殖苗，容易引起病毒病的扩张和蔓延 二、植物组织培养的基本过程 在无菌条件下，将植物器官或组织（如芽、茎尖、根尖或花药）的一部分切下来，放在适当的人工培养基上进行培养，这些器官或组织就会进行细胞分裂，形成新的组织。 脱分化又称去分化。由高度分化的植物组织或细胞产生愈伤组织的过程。 3、植物组织培养过程: 离体组织或细胞 植物体 脱分化 细胞分裂素≈生长素 愈伤组织 芽 根 细胞分裂素生长素 细胞分裂素生长素 再分化 植物细胞培养 不需要光 需要光 二、实验操作 （一）制备MS固体培养基 MS培养基包括20多种营养成分，实验室一般使用4。C保存配制好的培养基母液来制备 1、配置各种母液 ①无机物中大量元素浓缩10倍，微量元素浓缩100倍，常温保存 ②激素类、维生素类以及用量较小的有机物一般可按1mg/ml的质量浓度单独配制成母液 ③用母液配制培养基时，需要根据各种母液的浓缩倍数，计算用量 2、配置培养基 分装到锥形瓶中，每瓶分装50ml或100ml ① 配制培养液 ② 调PH ③培养基的分装 由于菊花的茎段的组织培养比较容易，因此不必添加植物激素 3、灭菌 分装好的培养基连同其他器械一起进行高压蒸汽灭菌 1、选材：菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝 （二）外植体消毒 2、消毒 ①流水冲洗 菊花茎段用流水冲洗后可少许洗衣粉，用软刷轻轻刷洗，刷洗后在流水下冲洗20min左右 ② 酒精处理 用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入体积分数为70％的酒精中摇动2－3次，持续6－7s，立即将外植体取出，在无菌水中清洗 ③消毒液处理 取出后用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入质量分数为0.1％的氯化汞溶液中1－2min，取出后在无菌水中至少清洗3次，漂净消毒液 外植体消毒 旺盛 嫩枝 (流水) 冲洗 刷洗，冲洗 20分钟左右 (无菌吸水纸) 吸干表面水分 (70％的酒精) 摇动2-3次6-7秒 (无菌水)清洗 (无菌吸水纸) 吸干表面水分 (氯化汞)溶液 浸泡1～2分钟 (无菌水)清洗 3次 （三）接种 污染的主要来源是空气中的细菌和孢子，接种室消毒是至关重要的。用70％的酒精喷雾使空气消毒， 酒精或新洁尔灭搽洗工作台并用紫外线照射20分钟 1、接种室消毒 2、无菌操作要求 操作要在酒精灯火焰旁完成，每次使用器械后，都需要用火焰灼烧灭菌，接种后立即盖好瓶盖。 3、材料的切取和接种 4、接种注意事项 ①每接种一块外植体前，镊子需放入体积分数为75％的酒精溶液中消毒一次，然后在酒精灯火焰上烧一遍，冷却后再接种 ②外植体在培养基中要分布均匀，放置外植体数量根据锥形瓶的大小确定，一般胡萝卜3－4块，菊的茎或叶6－8块，也不要太少，以充分利用培养基中的营养成分和光照条件 ③插入时应注意方向，不要倒插。茎段、茎尖基部插入培养基利于吸收水分和养分 思考：你打算做几组重复？你打算设置对照实验吗？ 答：每种材料或配方至少要做一组以上的重复。设置对照实验可以取用一个经过灭菌的装有培养基的锥形瓶，与接种操作后的锥形瓶一同培养，用以说明培养基制作合格，没有被杂菌污染。 （四）培养 培养过程应该放在无菌箱中进行，并定期进行消毒，保持适宜的温度和光照 （五）移栽 移栽生根的菊花试管苗之前，应先打开培养瓶的封口膜，让试管苗在培养间生长几日 1、打开封口膜 2、清洗转移 用流水清洗根部的培养基，将幼苗移植到消过毒的蛭石或珍珠岩等环境下生活一段时间 （六）栽培 3、移栽 珍珠岩：固体基质型，含水量高、蓄水性强、透性好，适合栽培 幼苗长壮后，移栽到土壤中 幼苗移栽后，每天观察并记录幼苗的生长情况，适时浇水、施肥，直至开花 Page ? * * 本作品采用知识共享署名-非商业性使用 2.5 中国大陆许可协议进行许可。 专业交流 模板超市 设计服务 本作品的提供是以适用知识共享组织的公共许可（ 简称“CCPL” 或 “许可”） 条款为前提的。本作品受著作权法以及其他相关法律的保护。对本作品的使用不得超越本许可授权的范围。 如您行使本许可授予的使用本作品的权利，就表明您接受并同意遵守本许可的条款。在您接受这些条款和规定的前提下，许可人授予您本许可所包括的权利。 查看全部… NordriDesign?中国专业PowerPoint媒体设计与开发 * * * 唐·杜甫《云安九日》： 寒花开已尽，菊蕊独盈枝。 旧摘人频异，轻香酒暂随。 课题1： 菊花的组织培养 一、植物的组织培养 （1）细胞的分化 ①概念： 在个体发育中，相同细胞的后代在形态、结构、生理功能上发生稳定性差异的过程 ②过程： 如：受精卵增殖、生长、分化形成组织、器官、系统 ③特点： （