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菌种传代与保藏 菌种传代与保藏 标准菌株主要来源 美国菌种保藏中心 （ATCC） American Type Culture Collection Center 中国普通微生物菌株保藏中心 （CGMCC） China General Microbiological Culture Collection Center 工业微生物菌种保藏管理中心 （CICC） China Center for Industrial Culture Collection 中国医学微生物菌种保藏中心 （CMCC） China Center for Medical Culture Collection 菌种传代与保藏 9203要求 标准菌株 ：来自认可的国内或国外菌种保藏机构的标准 菌株 标准储备菌株：从国内或国外菌种保藏机构获得的标准 菌株经过复活并在适宜的培养基中 生长后，即为标准 储备菌株。 工作菌株：由标准储备菌株, 转接一代获得的菌株。标 准储备菌株可用于制备每月或 每周 1 次转种的工作 菌株 菌种传代与保藏  9203要求  标准储备菌株保存时，可将培养物等份悬浮于培养基 中，并分装于小瓶中，  可采用低温冷冻干燥、液氮贮存、超低温冷冻（低于- 30℃）等方法保存。  低于-70 ℃或低温冷冻干燥方法可以延长菌种保存时 间。  冷冻菌种一旦解冻转种制备工作菌株后，不得重新冷 冻和再次使用。 菌种传代与保藏  9203要求  工作菌株的传代次数不得超过 5 代（从菌种保藏机构 获得的标准菌株为第 0 代），1 代是指将活的培养物 接种到微生物生长的新鲜培养基中培养   任何亚培养的形式均被认为是转种 或传代 1 次。  实验室应对工作菌株的特性和纯度进行确认。 菌种传代与保藏 菌种传代与保藏 菌液 斜面 平板 菌种传代与保藏 根据对氧气的需要情况分为： 需氧培养 微需氧微培养 厌氧培养 菌种传代与保藏 菌种保藏的原则 根据微生物生理、生化特点，人工创造条件，主要是 低温、干燥、缺氧三者，使微生物的代谢处于不活泼、 生长繁殖受抑制的休眠状态，以达到保持纯种优良性 状的目的。 菌种传代与保藏 长期保藏法： -80℃低温保藏法 真空冷冻干燥法 液氮超低温保藏法 沙土管保藏法 短期保藏法： 传代培养保藏法 液体石蜡保藏法 菌种传代与保藏 -80℃低温保藏法 将微生物菌种保藏在-80℃冰箱的一种保藏方法。原 理是低温条件可减缓微生物的新陈代谢，以达到长期 有效地保藏微生物 菌种传代与保藏 菌种传代与保藏  -20℃有效期12个月，100-1000CFU  简单、便捷、定量、活性稳定  金黄色葡萄球菌  枯草芽孢杆菌  铜绿假单胞菌  大肠埃希菌  黑曲霉等12种  根据说明书使用 菌种传代与保藏 传代培养保藏法 ——包括斜面培养和半固体培养等。 操作方法： 即将菌种穿刺到斜面或半固体中，培养好后放在低温干 燥处保存（2-5℃冰箱），定期传种，一般1-2个月移 植一次 (视菌种特征而定)。 菌种传代与保藏  标准菌种的申购记录（出库单或发票复印件）；  从标准菌株到工作菌株操作及记录  定期转种传代记录，时间，数量  纯度、特性等实验室所需关键指标的确认记录；每支 菌种都应注明 ：名称、标准号、接种日期、传代数、 操作者；  菌种使用记录，流转记录。  销毁记录 菌种传代与保藏 菌种保藏管理要求相关标准： 《病原微生物实验室生物安全管理条例》 GB 19489 —2008 实验室生物安全通用要求 GB/T 27405-2008 实验室质