放射示踪及自显影概要1.ppt

放射性核素标记化合物 定义： 放射性核素标记化合物（radionuclide labelled compound） 指在化合物分子中引入可起示踪作用的放射性核素，并保持原有化合物的理化和生物学性质不变。 基本原理： 一、同一性 放射性核素及其标记化合物和相应的非标记化合物具有相同的化学及生物学性质，在体内化学及生理代谢变化过程相同； 二、可测性 放射性核素能发出各种不同的射线，可被放射性探测仪器所测定或被感光材料所记录。而稳定性核素标记物则不然。 3.合乎生理条件：许多被研究的物质是系统内原有的成分，并且通常处于动态平衡状态，其含量及分布维持稳定状态。用放射性核素及其标记化合物所用示踪量足以用核探测仪器测出，但是其化学量可以是很少的，引入后几乎不会改变体内原有物质的含量，所以基本上不会改变体内或体外系统的正常生理平衡，实验结果接近正常生理状态物质的变化，准确可靠。 4.能定位和定性，在生物医学中应用广泛。比如利用RAG可检测示踪剂在组织、细胞内的分布情况等。用磷屏扫描仪可定性定量检测示踪剂 。广泛用于细胞生物学、分子生物学、免疫学、遗传学和基因工程研究。 放射性核素示踪技术的基本环节 一、放射性制剂的选择 1、核素标记位置的选择 科研选用核素标记化合物的标记位置要能满足研究目的需要。若观察分子上某基团或原子去向，应选择定位标记，必要时用双标记，避免将示踪原子标记在可交换位置，且在实验过程中核素不能脱标。 2、选择合适射线 进行体内示踪、功能测定或显像检查时选择仅发射γ射线的核素；微观放射自显影研究生物代谢宜选择发射β射线的核素3H14C35S 3、核素纯度和化学纯度 进行示踪研究时，做靶的物质不纯，则产物中就可搀杂另一种放射性核素，以此示踪将得不到正确实验结果。 4、选择合适半衰期核素 根据实验需要选择具合适半衰期的核素。对动物代谢实验，可选择半衰期较长的核素3H、14C标记的示踪剂，体外放射分析，则多选用125I。 5、放射性活度和发射射线能量的选择 同种射线粒子，能量越高，穿透和电离能力越强，辐射生物效应就越明显。这就要求在满足示踪量的前提下尽量降低活度以减少机体吸收剂量，防止有害的辐射效应，同时比活度过高也会导致辐射自分解。另外，功能测定或显像检查时选择仅发射γ射线的核素，细胞水平分子生物示踪研究时，宜选择发射低能β射线的核素3H、14C 二、示踪剂用量 包括示踪剂的放射性活度和化学量。示踪剂化学量极少，一般不会影响示踪结果，所以主要考虑活度，包括：实验中被稀释程度；示踪实验周期；示踪剂利用率；在体内的分布和排出；辐射生物效应；安全剂量；测量仪器的灵敏度。综合上述因素，可参考下列公式： ACK/DB A: 示踪剂放射性活度(dpm/ml) B: 本底计数率、 C: 示踪剂容积(ml) K: 测量仪器的灵敏度、探测效率 D：实验中稀释倍数 一般而言，小动物实验用量0.2-0.5μCi,多在10 μCi以下;离体实验用量小于1或几μCi。 (三)亚细胞水平的物质转运研究：为了说明亚细胞结构间的物质转运与细胞机能调控之间的关系，需进行亚细胞水平的物质转运研究。常用电镜ARG动态观察或分离亚细胞组分作放射性动态测量，还可以通过制备亚细胞结构间物质转运模型，即用一定的化学处理破坏细胞膜的特殊转运机制，但不打碎细胞，可以得到上述模型。例如用皂甙处理肝细胞，使其胞膜对胞浆中的成分能自由通透。这样一来细胞内的示踪物量反映颗粒性亚细胞结构中的示踪物含量，故而可以从改变培养液中的影响因素设计中，分析这些因素在细胞调控机制间的相互关系。 细胞动力学(Cell kinetics)是研究生物体内各类细胞的增殖、分化、消亡过程的规律，包括处于各种状态的时间参数、细胞数量、分布位置、细胞迁移途径及更新等。对某些疾病的诊断、治疗及估计预后有重要意义。一、示踪原理 处于S期的细胞因需合成DNA，故可摄取DNA的特异前身物胸腺嘧啶核苷(TdR)合成到新的DNA分子中，由于TdR及其分解产物均为可溶性，而DNA是不溶性的，因此，可通过一定的方法将它们与DNA分子分开。当将放射性核素标记的TdR引入待研究的实验体系后，放射性就会出现在被标记的细胞中。在细胞动力学研究中最多用的标记化合物为3H-TdR(或14C-TdR)，可采用离体或整体实验，由于体内实验存在射线辐射的影响，使用受到一定限制。放射自显影是最常用的方法之一 二、示踪的具体方法 细胞动力学的示踪研究最主要的是对细胞进行标记。根据对细胞的标记时间、次数以及标记后的采样情况可将放射性核素标记法分为： (一)一次脉冲标记法：根