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全血胆碱酯酶活性的分光光度测定方法 ----羟胺三氯化铁法 WS/T66-1996 一、原理 血液胆碱酯酶使乙酰胆碱分解为胆碱和乙酸。 未被胆碱酯酶水解而剩余的乙酰胆碱与碱性羟胺反应，生成乙酰羟胺，然后，与三氯化铁在酸性溶液中反应，形成红色羟肟酸铁络合物。颜色深度与剩余乙酰胆碱的量成正比。在波长520nm比色定量，由水解的乙酰胆碱的量计算胆碱酯酶活性。 二、仪器 分光光度计； 10mL比色管； 漏斗； 恒温水浴箱，控温±0.5℃； 采血针头； 血色素吸管。 三、试剂 本标准所用试剂均为分析纯试剂 1、实验用水，蒸馏水或具同等纯度的去离子水 2、盐酸溶液(1＋2) 3、碱性羟胺溶液，临用前将139g/L盐酸羟胺溶液和140g/L氢氧化钠溶液等体积混合 4、磷酸盐缓冲液(PH＝7.20)，准确称取磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O)8.36g和磷酸二氢钾(KH2PO4)1.36g，用水溶解并稀释到500mL，保存在冰箱内 5、三氯化铁溶液，称取10g三氯化铁(FeCl3·6H2O)，加0.84mL盐酸(4.2)，然后加水100mL。贮存于棕色瓶中 6、氯化乙酰胆碱标准液：贮备液70μmol/mL乙酰胆碱；临用前，取此溶液用磷酸盐缓冲液稀释10倍为应用液，7μmol/mL乙酰胆碱 四、采样、运输和保存 用血色素吸管，取耳垂血20μL，注入比色管中(事先加入0.98mL磷酸盐缓冲液