新硫脲试剂同步荧光法测定蛋白质应用研究.pdfVIP

V01．37 第37卷第1期 河南师范大学学报(自然科学版) No．1 HenanNormal 2009年1月 Journal Science) Jan．2009 of University(Natural 文章编号：1000一2367(2009)01--0089—04 新硫脲试剂同步荧光法测定蛋白质应用研究 崔凤灵1，孔晓朵2，卢 雁1，樊 静1，张贵生1，李建平1 (1．河南师范大学化学与环境科学学院，河南新乡453007；2．鹤壁职业技术学院医学院，河南鹤壁458030) 摘 分子探针，用同步荧光分析法测定BSA的新方法．在最佳实验条件下，EPAT—BSA体系的同步荧光强度在0～ 收率在95．1％～103．5％之间． 中图分类号：0657．3 文献标识码：A 蛋白质是生物体的必要营养成分，是生物、医药、食品及临床等行业中经常检验的指标．目前文献报道的 这些方法或灵敏度较低、或线性范围窄、或存在较强的吸附作用；近年来又建立了一些测定蛋白质的新方法 年被提出以来，由于其与普通荧光光度法和共振光散射法n叫相比具有光谱简化、谱带窄化、减小光谱重叠和 散射光影响等优点，已成功应用于多组分的同时测定[1u和生物分子[1胡的分析研究中． 硫脲类化合物及其衍生物是一类含硫的重要 有机试剂，可用于铜、铂、钯等金属元素的分析测 定n3【．用微波辅助新方法合成的新试剂N一(4一 叩，。卜一4一 乙氧苯基)一N’一(4一安替吡啉基)硫脲(EPAT) (图1)是杂环硫脲类衍生物的一种．以EPAT为 分子探针同步荧光技术测定牛血清中的总蛋白质 图1 EPAT的结构式 含量的方法还未见报道．结果表明，在最佳实验条 针，用同步荧光分析法测定BSA的新方法． 1 实验部分 1．1仪器与试剂 超级恒温器(上海市实验仪器厂)． 浓度为6．0×10一s DMF与水混合溶剂配制成浓度为3．0×lO．4 Tris—HCl(Tris为三羟基甲基氨基甲烷)缓冲溶液；0．50 收稿日期：2008--03—25；修回日期：2008—11—20 基金项目：国家自然科学基金；河南省高校科技创新团队支持计划资助(2008IRTSTHN002) 作者简介：崔凤灵(1963一)，女，满族，山东郓城人，河南师范大学教授，博士，主要从事蛋白质分析测定． 90 河南师范大学学报(自然科学版) 样品(河南周口兽医站)．所用试剂均为分析纯，实验用水均为二次蒸馏水． 1．2实验方法 在10mL的容量瓶中，依次加入2．0 mL mI。pH=7．40的Tris—HCI缓冲溶液、2．0NaCI水溶液、一定 量的BSA溶液和EPAT溶液，以二次蒸馏水定容，振荡摇匀．在AA=20nm，A。，=240～340nm，A。=260 360 am条件下，扫描EPAT存在时BSA的同步荧光光谱，并记录相应的同步荧光强度． 2结果与讨论 2．1同步荧光光谱 在EPAT与BSA相互作用的基础上[14|，在△A=20 nm条件下扫描了EPAT存在时体系的同步荧光光 谱(图2)．由图2可知：EPAT在305 除；体系EPAT—BSA在302 nm处有较强的同步荧光强度，且同步荧光强度随BSA浓度的增大而明显增强． 同步荧光强度与蛋白质浓度在一定范围内呈良好的线性关系，据此建立了一种以EPAT为分子光谱探针同 步荧光法测定蛋白质的新方法． 2．2△A的影响 研究了△A的变化对同步荧光强度的影响(△A：5～70nm)，结果表明，体系的同步荧光强度随着△A的增 大而增强．但是在△A小于