新的吲哚类同型二聚体荧光探针测定蛋白质的分析研究.pdfVIP

第26卷第12期 分析试验室 Ⅷ．26No．12 翌：王：：： ：!==j：=i!竺：=j兰生2：z 翌L：： 新的吲哚类同型二聚体荧光探针测定蛋白质的分析研究 林旭聪1，尹华2，郭良洽1，谢增鸿“ (1．福州大学化学化工学院，福州350002；2．幅州大学实验中心，福州350002) 摘要：采用新的水溶性吲哚类同型二聚体探针I，建立了一种新的蛋白质荧 光分析体系。在酸性条件下，蛋白质分子能与吲哚探针发生结合作用，体系荧 光明显增强并向长波方向发生红秽，荧光强度与蛋白质质量浓度呈良好的线性 关系。在最优条件下，牛血清白蛋白BsA的线性响应范围0．帅。2500一IIlL， 检出限(3一K)为005湖，mL；用于模拟样品的测定，1．00，2．00和5．00硝mL 的样品测定回收率为99．0％一1020％，相对标准偏差18％一28％；与国家 标准方法比较，结果测定偏差为1．0％～4．1％。 关键词：荧光测定；吲哚二聚体荧光探针；蛋白质 中图分类号：0657．3文献标识码：A 文章编号：10吣∞20(2∞7)12．00昏04 蛋白质分析在生命科学研究中占有重要地位， 质荧光测定技术具有良好的意义。 其分析方法的一直受到人们的关注…。目前测定 本文采用新的水溶性吲哚类双嵌探针I，考察 蛋白质的方法主要有紫外光谱法”】、化学发光 了该探针的特征光谱性能、pH和离子强度等因素 法“]，荧光分析“01及电化学法”1等。荧光分析选 影响，研究了该探针与血清蛋白的结合反应，建 择性好、灵敏度高，在生物分子分析领域应用广 立了一种简便，灵敏、稳定的新型荧光探针检测 泛”’“。由于蛋白内源荧光弱，应用外源探针荧光 蛋白质的分析体系，并用于血清模拟样品的分析 法测定蛋白质，灵敏度高、操作简便，已广泛用于 测定，结果良好。 蛋白质的定量分析。吲哚类二聚体探针是一类以 P 吲哚杂环结构为主的新型生物荧光染料”J。该类 染料经过修饰改性后，形成的磺酸盐易溶于水， ，s磷硷鼢毡辫。 光稳定性好，荧光量子产率高，与蛋白质结合后 。 l 荧光显著增强，灵敏度高，适合作为生物大分子 的定量分析探针，已广泛应用于生物分子的标记 吲哚类探针I结构式 和检测”““。目前，吲哚类聚合体荧光探针发展 迅速，系列吲哚化合物荧光探针相继被开发并在 l实验部分 生物分析中应用，吲哚类聚合体探针已成为新一 1．1仪器与试剂 代的生物分子荧光探针”2卅“。发展前景十分广 阔。通过二溴丁胺桥键，二聚体吲哚类探针I是我 们新开发的一种性能稳定的长链水溶性磺酸吲哚 (上海)。 探针，迄今为止有关该染料的研究尚未见报道， 开展光谱性能分析及应用研究对于建立新的蛋白 成浓度为1．00f吲mL的贮备液，4℃保存；吲哚 收稿日期：2007．04．16；修订日期：2007．05—28 作者简介：林旭聪(1976一)，男，讲师 一6一 专盏鬻；铲 嘶一舢髫感黧。。一。‰烯臻12 类探针I(实验室合成)，以水配制成浓度为3．0×构紧密程度增加，嵌人结合在蛋白分子内部的探 针自由扭动现象受阻，探针能量传递效率