水中氨氮的酶法测定.pdfVIP

第27卷 分析化学(删删AⅪ『E)研究简报 第6期 ChirIese 1999年6月 JoI枷a】0f 712～714 AnalyticalCI踟dsⅡy 水中氨氮的酶法测定 柳畅先’ 华崇理 孙小梅 (中南民族学院化学系，武汉430074) 摘要利用谷氨酸脱氢酶(GIDH)催化N瞰与a-酮戊二酸及NA工)H反应的原理，通过测定 NADH吸光度的变化率得出其酶促反应速度，对应不同N彤浓度而制得标准曲线，水样中氨 氮含量由测定值查标准曲线求得。检出限为0．3l m∥Lo讨论了pH值和抑制剂对测定的影 响。结果表明，本方法具有简便、快速、灵敏、准确及干扰少等优点。 关键词氨氮，酶法测定 1 引 言 水中的氨氮以游离氨和离子氨形式存在，主要来源于生活污水中含氮有机物受微生物作 用的分解产物，合成氨等工业废水以及农田排水等。氨氮含量较高时，对鱼类有毒害作用，对 人体也有不同程度的危害。氨氮的测定方法通常有纳氏试剂光度法，水杨酸一次氯酸盐光度 法，离子选择性电极法，以及化学发光法等¨。】。光度法易受水中共存组分以及水的色度和浊 度的干扰，需要相应的预处理，因而操作较繁琐，测定周期长。而电极法的可靠性也有待进一 步提高。酶法是70年代以来迅速发展的领域，它用以测定食品和血液中的氨氮已有报 道‘4～纠。 本文基于谷氨酸脱氢酶催化下列反应： NW+口一酮戊二酸+NADH兰望谷氨酸+NAD+H20 通过测定还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)吸光度的变化率得出其酶促反应速度，对应 不同NH4Cl浓度制得的标准曲线，从而可测得水样中的氨氮含量。由于酶促反应的专一性，可 避免试样中众多共存组分的干扰，减少繁杂的预处理过程。本文应用酶促反应速度测定法，不 需要底物转变完全，可减少测定时间，节省酶的用量，也使得测定更灵敏。另外，因为测定的是 吸光度的变化率，则可减少背景干扰，使结果更为准确可靠，适合于复杂的环境试样的测定。 2实验部分 ． 2．1仪器与试剂 厂)，p盼2D型精密酸度计(成都仪器厂)，WH一1型旋涡混合仪(上海沪西分析仪器厂)。 作液均用此溶液稀释。谷氨酸脱氢酶[GIDH]：0．2g／L。还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸 H洲L。口一酮戊二酸：0．5 mol／L。乙二胺四 [弛国H]：O．05 l谳／L。三羟甲基氨基甲烷[蹦s]：O．05 乙酸二钠[E明限]：O．2mol，L。其它试剂均为分析纯，水为二次蒸馏水。 1998．08．27收稿；1999—02．23接受。 本文系国家民委自然科学基金资助课题。 万方数据万方数据 第6期 柳畅先等：水中氨氮的酶法测定 713 2．2实验方法 0．05 于石英比色皿中加入3瑚L 皿O．5Ild／L口．酮戊二酸溶液以及10止O．05删L GLDH溶液，快速混匀后立即在所选定的波长处测定吸光度变化值(△A)(每隔15s读一次吸 光度值，共读10次)。计算反应速度(秽)： ／ ．，．、 △A×反应液体积(IllL) 秽L弘瑚l，肌nJ 2瓦石忑瓜i面面忑石万ii石而 3结果与讨论 3．1№蝴虹吸收光谱 本方法是通过NADH吸光度的变化率测定