生物分离工程第二章细胞破碎资料.ppt

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * （2）细胞膜组成 （A） （B） （3）影响产物释放的环境因素 在复杂培养基中生长的大肠杆菌细胞其破碎较单一培养基中生长的大肠杆菌细胞更难； 对数生长期的细胞会表现得更加脆弱。 从连续培养过程中获得的、具有较高比生长速率的念珠菌的细胞壁更加脆弱，而摇瓶培养的念珠菌体则有更加充裕的机会构建更加坚固的细胞壁。 酵母细胞壁的厚度和破碎阻力随年龄增长而增加 经常在幼酵母细胞中出现的芽痕（Bud scars）可引起酵母细胞局部细胞壁强度的降低 2、细胞破碎技术的分类 细胞破碎的目的 是释放出细胞内含物，其方法很多，按照是否存在外加作用力可分为机械法和非机械法两大类。 细胞破碎技术分类 细胞 破碎 机械破碎 高压均浆法，珠磨法、撞击破碎、超声波破碎 非机械破碎 物理法 渗透压冲击、冻结-融化、（超声波） 化学法 酸碱处理、化学试剂处理 生物法 酶溶、自溶、噬菌体 3、常用细胞破碎方法介绍 （1）机械破碎－高压匀浆 细胞悬浮液在高压的作用下从阀座与阀杆之间的环隙高速（可达到450 m/s）喷出后撞击到碰撞环上，细胞在受到高速撞击作用后，急剧释放到低压环境，从而在撞击力和剪切力等综合作用下破碎。 缺点： 这种方法较易造成堵塞的团状或丝状真菌，较小的革兰氏阳性首以及有些亚细胞器，质地坚硬，易损伤匀浆阀，也不适合用该法处理。 （2）机械破碎－－珠磨 珠磨机的破碎室内填充有80～85％（v/v）的玻璃（密度为2.5 g/ml）或氧化锆（密度为6.0 g/ml）的微球（粒径约0.1~1.0 mm）。在搅拌桨的高速搅拌下微球高速运动，微球与微球之间以及微球和细胞之间发生冲击和研磨，使悬浮液中的细胞受到研磨剪切和撞击而破碎。 缺点： 设备是珠后机，在珠波分离器的协助下，珠子被滞留在破碎室内，浆液流出，从而实现连续操作，破碎中，生的热量由夹套中的冷却液带走。存在的问题：操作参数多，一般凭经验估计并且珠子之间的液体损失30％左右。 （3）机械破碎－－撞击破碎 撞击破碎原理： 细胞悬浮液以喷雾状高速冻结（冻结速度为数千℃/min），形成粒径小于50 微米的微粒子，高速载气（如氮气，流速为300m/s）将冻结的微粒子送入破碎室，高速撞击撞击板，使冻结的细胞发生破碎。 （4）机械破碎－－超声波破碎 压电传感器将电子振荡器的交变电流转换为声波。在超声波的作用下液体发生空化作用，空穴的形成、增大和闭合产生极大的冲击波和剪切力，使细胞破碎。 缺点： 超声波破碎在实验室规模应用较普遍，处理少量样品时操作简便，液量损失少，但是超声波产生的化学自由基团能使某些敏感性活性物质变性失活。而且大容量装置声能传递，散热均有困难。 －非机械破碎之 酸碱处理 化学试剂处理 酶溶 自溶 渗透压冲击法 冻结-融化法 （5）化学渗透法 有些有机溶剂(如苯、甲苯)、抗生素、表面活性剂、金属螯合剂、变性剂等化学药品都可以改变细胞壁或膜的通透性从而使内合物有选择地渗透出来。其作用机理；化学渗透取决于化学试剂的类型以及细胞壁和膜的结构与组成。 缺点： 时间长，效率低；化学试剂毒性较强，同时对产物也有毒害作用，进一步分离时需要用透析等方法除去这些试剂；通用性差：某种试剂只能作用于某些特定类型的微生物细胞。  （6）酶溶法 就是用生物酶将细胞壁和细胞腊消化溶解的方法。常用的溶酶有溶菌酶，β-1，3-葡聚糖酶、蛋白酶等。 缺点： 易造成产物抑制作用，这可能是导致胞内物质释放率低的一个重要因素。而且溶酶价格高，限制了大规模利用。若回收溶酶，则又增加百分离纯化溶酶的操作。另外酶港法通用性差，不同菌种需选择不同的酶。 （7）破碎方式比较 ? 机械破碎 非机械破碎 物理 化学 生物 速度 效率 选择性 释放率 条件 高 高 差 大 剧烈 较低 差 高 低 温和 低 差 高 低 视方法定 低 差 高 低 ? （7）细胞破碎技术研究发展方向 1、多种破碎方法相结合 2、与上游过程相结合 （1）克隆噬菌体溶解基因 （2）耐高温产品的基因表达 3、与下游过程相结合 小结： 1、细胞分离 重力沉淀、离心沉淀、过滤 2、细胞破碎 机械破碎法与非机械破碎法，不同方法的区别 3、细胞破碎的发展方向。 作业： 1、常用细胞破碎方法的原理、特点及适用性。 2、机械法细胞破碎方法非机械破碎方法相比有何特点？ 人有了知识，就会具备各种分析能力， 明辨是非的能力。 所以我们要勤恳读书，广泛阅读， 古人说“书中自有黄金屋。 ”通过阅读科技书籍，我们能丰富知识， 培养逻辑思维能