发酵与酶工程第一章概要1.ppt

全局转录调控gTME （global transcription machinery engineering）： 整体水平上改变细胞基因组转录，获得有益细胞表型的一种全新的定向进化方法，能对微生物细胞进行目标性能全局强化，是在基因和细胞水平上改造微生物细胞的新途径。 通过对调控基因转录的转录元件（σ因子和各种转录因子等）进行合理化改组修饰 Alper H, Moxley J, Stephanopoulos G, et al．Engineering yeast transcription machinery for improved ethanol tolerance and produc- tion．Science, 2006, 314:1565－1568． 合成生物学？ 小节： 涉及到工业化生产，对于某一种特定的产品，只有特定的微生物(动、植物)才具有大量表达的潜力； 传统的诱变方法仍然是一种常用的方法，特别是自然选育是工业发酵稳产高产的重要保证； 目前土壤中已分离的微生物不到总数的1%，微生物的多样性仍然是以后若干年的研究重点； 基因重组、直接进化技术的应用，大大加快了生物产品 开发的进程。 合成生物学？ 第一章：工业微生物菌株 微生物的特性及工业微生物的要求 一些工业化产品生产菌种的特点 自然界中有目的微生物分离的原则 菌种选育、分子育种 有些微生物能在厌氧的条件下生长 有些微生物能利用简单的有机物、无机物满足自身的生长 有些微生物能进行复杂的代谢 有些微生物能利用较复杂的化合物 有些微生物能在极端的环境下生长 一、微生物的特性 二、工业化菌种的要求 能够利用廉价的原料，简单的培养基，大量高效地合成产物 有关合成产物的途径尽可能地简单，或者说菌种改造的可操性要强 遗传性能要相对稳定 不易感染它种微生物或噬菌体 生产特性要符合工艺要求 产生菌及其产物的毒性必须考虑（在分类学上最好与致病菌无关） 三、工业微生物的分离与筛选 工业微生物产生菌的筛选一般包括两大部分：一是从自然界分离所需要的菌株；二是把分离到的野生型菌株进一步纯化并进行代谢产物鉴别。 （1）向菌种保藏机构索取有关的菌株，从中筛选所需菌株。（2）由自然界采集样品，如土壤、水、动植物体等，从中进行分离筛选。（3）从一些发酵制品中分离目的菌株，如从酱油中分离蛋白酶产生菌，从酒醪中分离淀粉酶或糖化酶的产生菌等。该类发酵制品经过长期的自然选择，具有悠久的历史，从这些传统产品中容易筛选到理想的菌株。 采样时要注意的问题 根据土壤特点：5-25cm; 5-10cm(酵母); 10-30cm(北方地区) 结合微生物的生理特点 特殊环境下的采样 标签：地点、时间、气候等 采样 控制培养基的营养成分 富集的目的： 让目的微生物在种群中占优势，使筛选变得可能。 控制培养条件 抑制不需要的菌类 富集 富集培养主要根据微生物的碳、氮源、pH、温度、需氧等 生理因素加以控制。 分离 稀释涂布法： 划线分离法： 利用平皿的生化反应进行分离： 透明圈法 变色圈法 生长圈法 抑菌圈法 组织分离法： 单细胞或单孢子分离法： 实例：碱性纤维素酶产生菌的筛选 采样（造纸厂） 80℃、30 min处理 文献:产生菌为中性芽孢杆菌，嗜碱芽孢杆菌、放线菌 及霉菌 0.0075%曲利本蓝＋1%CMC（羧甲基纤维素），pH10.5 培养3～4天，选择有凹陷圈的菌落 从285个土样中获得62株 26株为组成型 36株为诱导型 ↓ 目的 提高生产能力 提高产品质量 开发新产品 解决生产实际问题 防止菌种退化 四、菌株选育、分子改造 方法 基因突变： 自然选育、诱变育种 基因重组： 杂交、原生质体融合、基因工程 基因的直接进化： 点突变、易错PCR、DNA Shuffling等 合成生物学 自然状态下，碱基对发生自然突变的机率为10-8～10-9 自然突变有两种情况： 一种是我们生产上所不希望看到的，表现为菌株的衰退和生产质量的下降，这种突变成为负突变。 另一种是我们生产上希望看到的，对生产有利，这种突变成为正突变。 （一）自然选育 自然选育在工业生产上的意义？极端微生物？ 自然选育虽然突变率很低，但却是工厂保证稳产高产的重要措施。 回复突变：高产菌株在传代的过程中，由于自然突变导致高产性状的丢失，生产性能下降，这种情况我们称为回复突变 问题： 高产菌株是正突变高，还是负突变高？ 自然选育操作步骤： 一般习惯上将自然选育称为菌种的分离纯化。 单细胞(孢子)悬液的制备 平板分离 挑选单菌落(注意形态的观察) 发酵试验