纳米级多孔负载人骨形成蛋白2基因修饰支架对前成骨细胞株分化的影响概要1.doc

纳米级多孔负载人骨形成蛋白2基因修饰支架对前成骨细胞株 分化的影响 阮 蔷，赵 刚，郭 睿，肖 月，李 超(佳木斯大学口腔医学院，黑龙江省佳木斯市 154007) 引用本文：阮蔷，赵刚，郭睿，肖月，李超. 纳米级多孔负载人骨形成蛋白2基因修饰支架对前成骨细胞株分化的影响[J].中国组织工程研究，2016，20(38):5657-5663. DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2016.38.005 ORCID: 0000-0002-4322-1423(阮蔷) 文章快速阅读： 文题释义： 高浓缩成骨基因聚合物：为高浓缩人骨形成蛋白2基因修饰的β磷酸三钙/胶原复合材料，具有良好生物相容性、骨诱导和骨传导性佳，是很有潜力的新型骨缺损修复材料，而高浓缩更大程度上有利于成骨能力。 DNA在两种具有互补特性的生物可降解材料多孔壁β磷酸三钙/胶原复合的研究基础上，通过阳离子多聚体的静电作用将带负电荷磷酸基团的 DNA 固定于支架上，设计编码骨形成蛋白2 的DNA 释放蛋白传递系统。就是缓释材料包裹生物活性因子或以生化技术将人骨形成蛋白2基因转染至质粒、腺病毒及脂质体等基因载体，经种子细胞或成骨细胞吞噬后，表达骨形成蛋白产物。β-磷酸三钙/胶原支架材料，并观察其对小鼠前成骨细胞MC3T3-E1分化的影响。 方法：制备纳米级多孔β-磷酸三钙/胶原支架并负载含人骨形成蛋白2目的基因的质粒DNA形成基因修饰的支架材料。建立小鼠前成骨细胞细胞株MC3T3-E1与复合支架的体外培养体系。将其分为支架组和平皿组，再根据质粒的浓度每组再分为2个小组。复合培养后取样通过扫描电镜和光镜进行细胞形态学观察；诱导1，3，7，14 d行茜素红染色观察钙结节情况；实时荧光定量PCR检测细胞周期；诱导1，3，7，14 d观察成骨细胞相关基因Ⅰ型胶原αⅠ链基因、锌指结构转录因子、骨唾液酸蛋白的表达。 结果与结论：①含人骨形成蛋白2为目的基因的质粒DNA修饰纳米β-磷酸三钙/Ⅰ型胶原溶液复合材料上细胞黏附数、分化数量及材料表面分布都高于单纯含人骨形成蛋白2为目的基因的质粒DNA(P 0.05)；②通过用茜素红染色、实时荧光定量PCR检测，结果显示支架组对小鼠前成骨细胞MC3T3-E1成骨能力的影响优于平皿组；③结果提示，负载人骨形成蛋白2基因修饰的β-磷酸三钙/胶原支架材料将具有骨传导性的支架与具有生物活性的成骨因子复合，形成复合支架同时具备骨传导性和骨诱导性，是一种理想的骨缺损修复材料。 关键词： 生物材料；骨生物材料；人骨形成蛋白2；β-磷酸三钙/胶原；分化；骨缺损；黑龙江省自然科学基金 主题词： 骨形态发生蛋白质类；胶原；细胞分化；组织工程 基金资助： 黑龙江省自然科学基金项目(H201487)；佳木斯大学研究生创新项目(LZR2015_015) Effects of nano porous beta-tricalcium phosphate/collagen scaffold modified with human bone morphogenetic protein 2 gene on differentiation of MC3T3-E1 cell lines Ruan Qiang, Zhao Gang, Guo Rui, Xiao Yue, Li Chao (School of Stomatology, Jiamusi University, Jiamusi 154007, Heilongjiang Province, China) Abstract BACKGROUND: Bone tissue transplantation or osteogenic material filling is after used for bone defect repair. To remove autologous bone tissues can lead to additional damage and secondary deformity, therefore, it is extremely urgent to search for a new osteogenic material. OBJECTIVE: To construct the porous β-tricalcium phosphate (β-TCP)/collagen scaffold modified with human bone morphogenetic protein 2 (hBMP2) gene, and to observe its effects on differentiation of MC3T3-E1 cell l