狂犬病病毒不同毒株的形态学研究论文.pdfVIP

狂犬病病毒不同毒株的形态学研究 刘霓红蔡红李成 (中国农业科学院哈尔滨兽医研究所，哈尔滨 150001) 狂犬病是由弹状病毒科、狂犬病病毒属成员中的代表种一狂犬病病毒引起的一种危害极为严 重的人畜共患病，该病几乎所有温血动物都有发生。它流行，。，宿主多，死亡率高，是人类迄今 为止尚未能征服的疫病之一。目前主要还是以预防接种疫苗及高免血清和免疫球蛋自来防制本 病。本实验旨在研究狂犬病病毒形态及数量与其毒力及免疫原性的关系。 1材料和方法 1．1种毒 犬用口服狂犬病疫凿”的制备。ERA株(兽用疫苗弱毒株)：来源于SAD株猪肾细胞3545代， 毒MLD50=10。59003m1)。CVS株：鼠脑固定毒，为标准攻击毒株。 1．2细胞与动物 BHK21与Vero细胞株。小鼠由本单位动物室提供。 1．3超薄切片法 戊二醛及1％四氧化锇固定，脱水后环氧丙烷与Epon812环氧树脂混合液包埋，玻璃刀切片。醋 酸铀和柠檬酸铅电子染色，电镜观察。 1．4负染色 分别取接种ERA毒(／vlLD50=104 钟，染色后立即吸干镜检。 2结果 2．1 多量的狂犬病病毒粒子，多数粒子呈短弹头样，有的呈窝窝头样(削了顶的粒子)，有的呈长弹 头样(图1)。在图l中比较典型的弹状形态如长箭头所指，该粒子长约160nra，底边宽约80nm。 多数粒子在底边向其粒子中央部延伸，称为槽沟结构，PTA染色较深。说明该部位为中空结构， 是由于PTA进入而产生的结果。在插图1-1中，可观察到弹型粒子，在该粒子外表可看到细而 密集、排列整齐的纤突结构(空箭头)。另外，在多数粒子中，靠近粒子底边的一侧有尾样结构， 该结构形态不一。多数呈球形，以蒂样物与粒子底边一侧相连。此结构似乎是由于粒子底边断裂 而形成的(图1)。 2．2 CTN毒株接种小鼠脑组织，其脑组织经超薄切片后观察，虽发现了狂犬病病毒粒子，但其 数量较少。在诸多视野中，仅在其中一个视野中发现了病毒粒子(囝2)。在图2中显示出病毒 ff)，该纵断面似乎与膜样结构相连，是正在出芽 粒子的横断面(f)、斜断面(¨)、纵断面(f 成熟阶段。 CTN毒株接种Vero细胞培养物，进行3个代次，负染色后观察，均未发现狂犬病病毒粒子。 38 2．3 CVS毒株接种小鼠脑组织，其脑组织经超薄切片后观察，较容易发现病毒粒f。如蚓3所 示，病毒粒子堆积在粗面内质网小池中，其中多数粒子由内质网小池膜正在以出芽方式获得囊膜 达到成熟。在这些粒f中也可观察到粒子的横断面、斜断面和纵断面。从粒子的纵断面看来粒子 的长与底边宽之比是属于典型的长宽之比。另外，在蚓3中也能看到拄状粒子(箭头)。 2．4经挑选大蚀斑克隆的ERA毒株接种小鼠脑组织，其脑组织经超薄切片后观察，发现该病毒 量比CVS还要多。人部分聚集或分散的病毒粒子位于宿主细胞浆内的空泡中，并以多种方位通 过膜性结构出芽成熟。粒子呈现出多样性，有的两粒子底边相对，外表早梭形、牛角形或哑铃形， 有的三个以上粒子底边相对，整个外观成花瓣状(图4．5)。 2．5未经挑选蚀斑的ERA毒株接种B卸Q1细胞培养物，其培养物经超薄切片后观察，发现在 宿主细胞胞浆中的大小空泡内有许多病毒粒子，以出芽方式获得囊膜成熟，另外，在胞浆内还看 到了病毒包涵体，该包涵体是以病毒粒子为主的聚堆物，在粒子间有电子散射力较均匀物质存在， 在包涵体外围一般看不到有膜样结构(图6)。 狂犬病病毒粒子无论是在小鼠脑组织细胞，还是在传代细胞，在其细胞核内均未被发现，这 说明该病毒是在宿主细胞浆内装配和成熟的。 3讨论 典型狂犬病病毒粒子的负染形态结构：完整粒子呈弹头状，粒子顶端呈钝圆形，底边呈直线 负染液衬托下呈白色外观，但多数粒子中央部为电子散射力较强的槽沟结构，其长约占粒子全部 的2／3。 当PTA液浸入粒子内部时，发现其内部被螺旋对称的核农壳所填充，有规律盘旋的核 衣壳被病毒膜包裹，病毒膜表面附有长为6-7ran的纤突，纤突与病毒膜构成囊膜；超薄切片上 的形态结构由于醋酸铀与柠檬酸铅是正染色，所以病毒粒子呈黑色外观。由于病毒增殖发育不同 阶段，形成了不同形态，再加上不同的切片方位及不同的观察角度，所以病毒粒子呈现出多种形 态。一般说来，病毒粒子的横断面呈圆形，斜断面呈椭圆形，纵断面呈弹头形、锥形或柱形。病 毒粒子中央部的核衣壳呈淡染，囊膜为浓染。以上观