填料的选择概要1.pptVIP

如何选择凝胶？ 五大类层析方法 - 1. 凝胶过滤 ( GC) 2. 离子交换 ( IEX) 3. 亲和层析 ( AC) 4. 疏水层析 ( HIC) 5. 反相层析 ( RPC) 介质的普遍性质 介质 - 颗粒越细、大小越均匀，分辨率越高，但反压亦较 高 (SOURCE介质例外)，HP代表细颗粒，FF代表高流速，XL代表高载量。 Big Beads 物理稳定性 - 新一代介质较坚固，能承受高流速，同时保 持柱床体积和结构稳定，省却每次重新装柱，提高重复性 化学稳定性 - 新一代介质能承受极端pH，高盐度，促溶剂 和有机溶剂，利于开发分离条件和在位清洗(CIP)，大大延 长介质寿命和提高重复性 BioProcess 凝胶 特别适合生产应用, 特点包括： 高重复性：适用于任何规模的工艺放大 高物理、化学稳定性：易于清洗、消毒及再生、介质 寿命特长 高动力载量、流速快：缩短生产周期和次数，节省凝胶用量(尤其XL介质，载量可比普通介质高达10倍！) 每种凝胶均有完整的文献、档案和Regulatory Support File 适用於三步纯化策略的层析技术 目的 纯化粗样 快速浓缩 (减少体积) 和稳定样品 (去除蛋白酶) 最适用层析技术: 离子交换 / 疏水层析 粗提: 离子交换填料 粗提: 疏水层析填料 Sepharose FF Phenyl (苯基) Butyl（丁基） Octyl(辛基） HiPrep? 16/10 中度纯化 目的 去除大部分杂质 最适用层析技术: 离子交换 / 疏水层析 中度纯化: 离子交换填料 中度纯化:疏水层析填料 目的 达到最终纯度 (去除聚合物,结构变异物) 最适用层析技术: 凝胶过滤/离子交换 / 疏水层析/反相层析 精细纯化: 凝胶过滤填料 精细纯化:疏水层析填料 精细纯化:反相层析填料 凝胶过滤介质 凝胶过滤 种类 Sephadex Sepharose Sephacryl Superdex Superose Sephadex Sephadex 是由葡聚糖交联异表氯醇形成的多孔结构 Sepharose Sepharose是由琼脂糖交联形成的多孔结构。使用pH范围4-9，使用温度范围4-40℃。短期可使用Gu.HCl和Urea等变性剂，不能使用chaotropic salt 如KSCN等。长期使用Gu.HCl和Urea等变性剂或使用chaotropic salt 时，应选择Sepharose-Cl 系列。 Sepharose-Cl 系列是Sepharose是在碱性条件下结合2.3-二溴丙醇，增强了Sepharose的物理化学稳定性，特别适合含有机溶剂的分离，能承受较强的在位清洗，并可高温消毒。 Sephacryl  Sephacryl是葡聚糖交联Ｎ,Ｎ－亚甲基二乙酰胺形成的。具有良好的机械性能，比传统的Sephadex化学稳定性高。可用０.５ＭNaOH进行清洗。短期可使用有机溶剂，并可在121℃灭菌。也可使用变性剂。 SuperoseSuperose是由高度交联的琼脂糖形成的多孔球形结构。根椐颗粒大小分为两类： 操作pH为3-12，清洗时pH为1-14。如0.2M的NaOH和0.01M的HCl以及1M的乙酸。清洗时可用0.5M的NaOH和0.5M的HCl。同时，也可使用1%的SDS，8M的Urea和6M的Gu.Cl。可在pH7，121℃灭菌30Min。 Superdex Superdex是由高度交联的结合有葡聚糖的琼脂糖形成的多孔结构。具有低吸附，化学物理稳定性高，可0.1MHCl,０.５MNacl进行清洗。可使用高浓度的变性剂。 Superdex Peptide - 纯化小生物分子的新选择 市面上唯一分离范围是100-7000 的凝胶过滤介质 选择性和分辨率高，颗粒大小 只有13um 高化学稳定性，pH1-14 都可工作，有机溶剂亦可，如 乙腈+三氟乙酸 结合了Sephadex的高选择性和琼脂糖的高物理稳定性，在高 流速下不会变形 离子交换介质 最受欢迎的层析纯化方法 强阴Q、强阳S和SP、弱阴DEAE、弱阳CM分别在于 介质完全离子化的pH范围，较宽者为强，与结合强度无关；工作pH范围宽广，更易保持高载量，所以宜用 强者代替弱者 传统的纤维素介质如DE52，CM52由于流速慢，柱床 高度随缓冲液改变，又不能承受0.1M NaOH在位清洗 ，重生效果差，所以已被Sepharose Fast Flow 等为 基架的离子交换介质代替 Mono Q HR, Mono S HR 预装柱: 10um均一颗粒， 高分辨率，大量应用文献 SOURCE15Q, 30Q, 15S,