1,25(OH)2D3抑制肝癌细胞HDAC2活性及促进p21WAFICIP1表达的研究.pdfVIP

贵阳医学院 2014 届硕士研究生论文 1,25(OH) D 抑制肝癌细胞HDAC2活性及促进 2 3 p21 WAFI ／CIP1 表达的研究 专 业：临床检验诊断学 研究生：孔维莹 导 师：黄韵祝 教授 摘要 目的： 本课题通过研究1,25(OH) D 对肝癌细胞中组蛋白去乙酰化酶2 （HDAC2）的抑 2 3 制作用和细胞周期蛋白的表达情况，探讨1,25(OH) D 是否通过抑制HDAC2表达来 2 3 促进了p21 WAFI ／CIP1 高表达，致使人肝癌细胞株停滞于GO/GI 期，从而调节肝癌细 胞的增殖和分化。 方法： 本课题首先培养人肝癌细胞株 （HpG2）,用CCK-8试剂盒检测1,25(OH) D 细 2 3对 胞的增殖抑制作用，得出1,25 （OH）D 对肝癌细胞的抑制率的趋势；在不同时间 2 3 点和不同浓度梯度用1,25 （OH）D 来处理细胞，提取细胞的核蛋白和RNA，并用 2 3 RT-PCR技术检测p21WAFI ／CIP1 和HDAC2的mRNA水平，用Western blot印迹技术检测 HDAC2和p21WAFI ／CIP1 蛋白的表达。 结果： 1、CCK-8 试剂盒检测显示1,25 （OH）D 对肝癌细胞有抑制作用，并随着加药时 2 3 间的延长和药物浓度的增加，抑制率呈现明显升高趋势，且各浓度实验组和对照 组比较，差异都具有统计学意义。 2、用核蛋白试剂盒和RNA 提取试剂盒成功提取出加药组.乙醇组和对照组的核蛋 白和RNA。 3、RT-PCR 检测出在加药后的 24H，48H，72H 随着 1,25 （OH）D 浓度的增高， 2 3 HDAC2 的mRNA 表达水平呈降低趋势，各时间点的对照组和实验组差异有统计学 意义;加药后的24H，48H，72H 随着1,25 （OH）D 浓度的增高，p21WAFI ／CIP1 的mRNA 2 3 表达水平呈升高趋势。 4、Western blot 印迹技术检测在加药后的 24H，48H，72H 随着 1,25 （OH）D 2 3 浓度的增高，HDAC2 的蛋白表达水平呈降低趋势，各时间点的对照组和实验组差 3 贵阳医学院 2014 届硕士研究生论文 异有统计学意义;加药后的24H，48H，72H 随着1,25 （OH）D 浓度的增高，p21WAFI 2 3 ／CIP1 的蛋白表达水平呈升高趋势。 结论： 1、1,25 （OH）D 对肝癌细胞的增殖有抑制作用。 2 3 2、1,25(OH) D 在mRNA 表达水平是抑制HDAC2 表达和促进了p21 WAFI ／CIP1 高表达。 2 3 3、1,25(OH) D 在蛋白表达水平是抑制HDAC2 表达