12-脂氧合酶通过上皮间质转化促进胃癌侵袭转移的机制研究.pdfVIP

目 录 中文摘要 1 英文摘要 3 中英文缩略词表 5 前言 6 材料和方法 9 1 材料 9 1.1 实验细胞株 9 1.2 仪器设备 9 1.3 实验试剂 10 1.4 临床资料 11 2 方法 11 2.1 免疫组化法 11 2.2 细胞复苏、体外培养、传代及冻存 13 2.3 实时荧光定量PCR(SYBR Green 法) 14 2.4 蛋白免疫印迹法(Western Blot) 17 2.5 构建12-LOX 过表达胃癌细胞株 22 2.6 实验分组 24 2.7 细胞划痕实验、Transwell 迁移、侵袭实验 24 2.8 Q-PCR、Western Blot 法检测E-cadherin、N-cadherin 26 2.9 统计学处理 26 结果 27 1 构建过表达12-LOX 的SGC-7901 胃癌细胞株 27 2 12-LOX 促进胃癌细胞SGC-7901 的迁移、侵袭 31 3 胃癌细胞中12-LOX 与EMT 相关蛋白表达的关系 33 4 胃癌组织中12-LOX 及EMT 相关蛋白表达水平 35 讨论 39 结论 43 参考文献 44 综述 49 12-脂氧合酶通过上皮间质转化促进胃癌侵袭 转移的机制研究 中文摘要 【目的】： 1. 构建过表达12-LOX 的SGC-7901 胃癌细胞株。 2. 分析12-LOX 与胃癌细胞迁移、侵袭能力及与EMT 的相关性。 3. 分析胃癌组织中12-LOX 、E-cadherin、N-cadherin 蛋白的表达水平、与临床 病理特征及三者之间的关系。 【方法】： Q-PCR、Western blot 法筛选出低表达12-LOX 的胃癌细胞株；12-LOX 过表达 的慢病毒感染SGC-7901 胃癌细胞，成功构建高表达12-LOX 的胃癌细胞株；细胞 划痕实验、Transwell 法检测对照组 SGC-7901、Mock 组 SGC-7901、12-LOX 组 SGC-7901 细胞的迁移及侵袭能力；Q-PCR 、Western blot 法检测三组细胞 E-cadherin、N-cadherin 的表达及其与12-LOX 的关系；免疫组化检测105 例胃癌 组织和43 例正常胃组织中12-LOX、E-cadherin、N-cadherin 蛋白的表达水平；统 计分析胃癌组织 12-LOX、E-cadherin、N-cadherin 与临床病理特征的关系以及三 者之间的相关性。 【结果】： 1. 成功获得高表达12-LOX 的胃癌SGC-7901 细胞株。 2. 胃癌细胞迁移和侵袭实验显示：12-LOX 组迁移或侵袭进入下室的细胞数明 显高于Mock 组和Control 组，p0.05 。同时Mock 组和Control 组未见明显差异。 3. Q-PCR 和Wester