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显微技术
1、?荧光显微镜是常用的细胞定性定量分析的光学仪器,请查阅文献详述其原理。 荧光显微镜技术在光学显微镜领域占有极为重要的地位。自1904年库列创建以紫外光为光源,激发出荧光,以观察细胞组织结构的方法以来,各国已开发出系列化的荧光显微镜产品,在医学和生物学的研究中获得了广泛的应用。荧光显微镜是其基本原理是利用一定波长的激发光对样品进行激发,使之产生一定波长的荧光从而对样品的机构和组分进行定位、定量、定性观察检测。以紫外线为光源, 用以照射被检物体, 使之发出荧光, 然后在显微镜下观察物体的形状及其所在位置。荧光显微镜用于研究细胞内物质的吸收、运输、化学物质的分布及定位等。 细胞中有些物质,如叶绿素等,受紫外线照射后可发荧光;另有一些物质本身虽不能发荧光,但如果用荧光染料或荧光抗体染色后,经紫外线照射亦可发荧光,荧光显微镜就是对这类物质进行定性和定量研究的工具之一。 荧光显微分析是通过观察与检测光学切片、单细胞中的自发荧光或是与信号分子相结合的荧光染料的荧光,并对其荧光特性进行分析的一种技术。它能在亚细胞水平观察细胞骨架的动态变化、细胞内特异蛋白的定位、PH和钙离子的浓度变化、细胞器的分布等,根据荧光特性不同进行细胞的分选、定量测定细胞内物质的含量并观察细胞生理活动与细胞形态及运动变化的相互关系。 荧光显微分析方法灵敏度高,选择性好,试样量小,在细胞生物学研究中有着越来越广泛的应用。由于大多数生物分子本身无荧光或荧光较弱,检测灵敏度较差,人们用强荧光的标记试剂或荧光生成试剂对待测物进行标记或衍生,生成具有高荧光强度的共价或非共价结合的物质,利用荧光分析仪器对其进行监测分析。 普通荧光显微镜是荧光细胞化学的基本工具,突出优势表现在对活体材料的观测方面,而传统的光学显微镜绝大多数是对无生命活性的植物染色切片或单细胞进行观察拍照,电子显微镜的观察材料则是完全失活的植物材料,同时荧光显微镜又具备了植物体内自发荧光或是荧光标记的物质的观察与初步定位的功能,与放射性同位素标记相比,在对被测物质进行准确定位的同时,其安全性又大为提高。 普通荧光显微镜初期用于观察动植物标本的自然荧光,其灵敏度较低,并且不能定量的给出图像发光的强度数值。随着现代生物的发展,需求荧光显微镜给出一定精度定量数据,定量分析细胞内荧光物质的发光强度和空间分布。在普通荧光显微镜的基础上加上能够定量测定细胞内荧光物质的附件即可进行定量研究。高灵敏度的荧光显微镜是在普通显微镜上加上高灵敏度弱光成像器作为图像接收器,它具有结构简单、灵敏度高和定量化的特点,在给出细胞荧光图像的同时,可以给出细胞图像任意像元的发光强度值,作为判断细胞细微生理变化的依据随着灵敏度的进一步提高, 出现了超高灵敏度荧光显微镜, 它是利用第二代像增强器代替了高灵敏度荧光显微镜中的第一代像增强器, 可以获得细胞的光子灵敏显微图像, 并结合图像融合技术, 实现极微弱荧光图像的定位显示, 同时, 采用具有视频速率的图像采集系统, 可用于研究某区域荧光强度随时间变化的动力学过程, 并开始应用于细胞凋亡过程中 Ca2 +浓度变化的研究。 在普通荧光显微镜上配置光子检测系统和计算机处理控制系统就构成了显微荧光分光光度检测系统,就能够对样品进行原位荧光光谱分析,即利用荧光显微镜获得的荧光图象经过光谱融合处理后得到光谱图像,其中每一点都记录着相应点在不同波长激发下的全部荧光信息,可以方便的获取任意一点的光谱曲线。 适应现代生物学和医学向分子、细胞水平的定量研究需要,采用先进的光电技术和计算机技术,设计开发了符合实用要求的细胞显微荧光定量分析系统,证明可在利用现有设备基础上通过低成本的技术改造达到国外昂贵、复杂系统的性能,解决了理论、设计和研制工作的关键问题,为研制、生产符合国情的新颖细胞显微荧光定量分析仪器提供了基础.在进一步仪器化技术开发工作中,要在计算机软件功能拓宽,扩大应用使用范围,引入双波长检测以及仪器的商品化设计、制造工艺研究等方面,再做更多细致的技术性工艺性工作。参考文献:荧光显微镜技术的基本原理与方法_杨弘远荧光显微分析技术在植物细胞学研究中的应用_姜淑媛?激光共聚焦扫描显微镜是现代最先进的细胞分析仪器之一,请查阅资料,了解其工作原理和特点。激光共聚焦扫描显微镜是近代生物医学图像仪器的重要发展之一,他是在荧光显微镜成像的基础上加装激光扫描装置,使用紫外光或可见光激发荧光探针,利用计算机进行图像处理,从而得到细胞或组织内部微细结构的荧光图像,以及在亚细胞水平上观察诸如钙离子、PH值,膜电位等生理信号及细胞形态变化。已广泛应用于细胞生物学、生理学、病理学、解剖学、胚胎学、免疫学和神经生物学等领域,对生物样品进行定性、定量、定时和定位研究具有很大的优越性,为这些领域新一代强有力的研究工具。激光
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