HMGB1、RAGE、NF-KB在小鼠急性肝衰竭中表达的研究.pdfVIP

贵阳医学院 2014 届硕士研究生论文 HMGB1、RAGE、NF-KB 在小鼠急性肝衰竭中表达的研究 病理学与病理生理学 研究生：危敏 导师：杨勤 教授 [摘 要] 目的：观察D-氨基半乳糖(D-GaIN)及脂多糖(LPS)致小鼠急性肝衰竭发生 过程中高迁移率族蛋白B1 （HMGB1）、晚期糖基化终末产物受体( RAGE)、核转 录因子（NF-KB）在小鼠肝脏的表达变化，探讨HMGB1 介导的RAGE/ NF-KB 信号 通路在急性肝衰竭发病机制中可能的作用。方法：雄性昆明种小鼠 64 只，随机 分为正常对照4 小时、8 小时、12 小时、24 小时组，急性肝衰竭模型4 小时、8 小时、12 小时、24 小时组。腹腔同时注射D-Galn500mg/Kg、LPS10ug/Kg 制备急 性肝衰竭模型，分别在造模4 小时、8 小时、12 小时、24 小时末处死小鼠，测 定血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆红素（TBIL）的含量，观察肝 组织学改变，免疫组化SABC 法检测正常4 小时、8 小时、12 小时、24 小时组及 相应肝衰竭组小鼠肝组织中HMGB1、RAGE、NF-KBp65 的表达情况，并用实时荧光 定量PCR （Real time-PCR）的方法测定正常4 小时、8 小时、12 小时、24 小时 组及相应肝衰竭组小鼠肝组织中HMGB1、RAGE、NF-KBp65 的mRNA 表达水平变化。 结果：急性肝衰竭模型组小鼠血清ALT 和AST 含量均显著高于相应正常对照组小 鼠(P0.01)，且急性肝衰竭模型8 小时、12 小时、24 小时组小鼠血清TBIL 含量 显著高于相应正常对照(P0.05)。病理学观察，急性肝衰竭4 小时组小鼠肝脏肝 细胞轻度肿胀、嗜酸性变、炎细胞浸润,可见核内包涵体，肝细胞呈点状坏死， 急性肝衰竭8 小时组小鼠肝脏中肝细胞呈桥接坏死，急性肝衰竭12 小时组小鼠 肝脏中肝细胞片状坏死融合，核溶解、碎裂，汇管区及肝细胞间见较多炎细胞浸 润伴少量出血，急性肝衰竭24 小时组肝细胞坏死更加明显，大片状坏死和少量 出血，仅少量肝细胞残存，散在分布，纤维网状支架塌陷。免疫组化显示，急性 肝衰竭模型组小鼠肝组织中HMGB1 主要表达在肝细胞胞浆和肝细胞坏死区，HMGB1 阳性表达量较相应正常对照组显著增加（P0.01），且随肝衰竭发展表达明显增加。 急性肝衰竭模型组小鼠肝组织中RAGE 主要表达在炎细胞浸润区和肝细胞坏死区， RAGE 阳性表达量较相应正常对照组显著增加（P0.01）。急性肝衰竭模型组小鼠 肝组织中NF- κBp65 主要表达在炎细胞浸润区和肝细胞胞浆。NF- κBp65 阳性表 达量较相应正常对照组显著增加（P0.01），且随肝衰竭发展明显增加。Real 3 贵阳医学院 2014 届硕士研究生论文 time-PCR 检测结果显示，急性肝衰竭模型组小鼠肝组织HMGB1mRNA 表达量显著高 于相应正常对照组（P0.05），且随肝衰竭发展增加。急性肝衰竭模型组小鼠肝组 织RAGEmRNA 表达量显著高于相应正常对照组（P0.05），且随肝衰竭发展升高。 急性肝衰竭模型组小鼠肝组织NF- κBp65mRNA 表达量显著高于相应正常对照组 （P0.05），且随肝衰竭发展增加。结论：D-Galn 及LPS 诱导的小鼠急性肝衰竭 发生过程中过程中小鼠肝脏 HMGB1 、RAGE 、NF-KBp65 的表达水平有明显的 改变，且随着肝衰竭进展而呈逐渐升高趋势，提示肝脏 HMGB1 可能通过介导 RAGE 、NF-KBp65 而参与了小鼠急性肝衰竭的发生发展。 [关键词] 小鼠；急性肝衰竭；肝脏；HMGB1 ；RAGE ；NF-KBp65 1.前 言 肝脏疾病 (如病毒性肝炎、自身免疫性肝炎、酒精性肝病、肝纤维化及肝硬 化等)严重危害人类健康。急性肝功能衰竭 ( acute hepatic failure, AHF) 是 由病毒、药物、免疫、代谢等多种因素引起的肝细胞大量坏死而导致的严重的症 候群，是一种涉及多器官的临床综合征，以快速发展的肝性脑病和严重的肝功能 损害为特征，而产生一系列并发症。临床死亡率较高，尚缺乏特异性的治疗措施。 最终可能出