MALT淋巴瘤中P16基因及P53基因突变与微卫星不稳定性和杂合性缺失的关系研究.pdfVIP

贵阳医学院2012 届硕士研究生论文 MALT 淋巴瘤中P16 基因及 P53 基因突变 与微卫星不稳定性和杂合性缺失的关系研究 病理学与病理生理学 研究生 陈春林 导师 邓飞 教授 于燕妮 教授 摘要:目的：研究 P16 及P53 基因突变与微卫星不稳定性(MSI)和杂合性缺 失(LOH)在粘膜相关淋巴组织(MALT)淋巴瘤发生发展中的作用，同时探讨 P16 及P53 基因突变与MSI 和 LOH 之间的相互关系。方法：采用 DNA 抽 提试剂盒从石蜡块中提取18例已确诊为MALT 淋巴瘤患者的基因组DNA ， 然后应用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP) 分析及测序的方法研 究P16 基因外显子 1、2 以及P53 基因外显子 5 、6 、7 、8 的突变情况；选 取P16 基因附近4 个微卫星(MS)位点（D9S 152、D9S 153、D9S257 、D9S272 ） 和 P53 基因附近4 个 MS 位点 （D17S790 、D17S798 、D17S806 、D17S948 ）， 分别检测它们的MSI 和 LOH 情况。结果：经过测序，肿瘤组织与自身正 常组织比较，P16 基因总突变率为72.2%( 13/18) ，P53 基因总突变率为55.6% （10/18），肿瘤组织碱基可发生颠换、转换、丢失或插入，发现 5 个高频 率突变位点：P16 基因外显子 1 第24 位及第 189 位碱基，外显子 2b 第65 位及第 132 位碱基，P53 基因外显子 8 第50 位碱基。P16 基因附近 MS 位 点MSI 总阳性率为 44.4%(8/18) ，P53 基因附近 MS 位点 MSI 总阳性率为 61.1% (11/18) ，各位点MSI 阳性率介于11.1%~33.3%之间。在 18 例 MALT 淋巴瘤中，有 3 例为高频率MSI （MSI-H ），9 例为低频率 MSI （MSI-L ）， 6 例为 MS 稳定 （MSS ）。P16 基因附近 MS 位点 LOH 总阳性率为 27.8%(5/18) ，P53 基因附近 MS 位点 LOH 总阳性率 33.3%(6/18) ，各位点 - + LOH 阳性率介于5.6%~ 16.7%之间。与MSI 组相比，MSI 组P16 及P53 基 + - 因突变率均较高，其中，D17S798 位点 MSI 组与 MSI 组 P53 基因突变率 比较具有统计学意义（P=0.036 ，P ﹤0.05 ）。MSI-H 样本与 MSI-L 样本的 P16 及 P53 基因突变率均大于 MSS 样本，MSI-L 样本与 MSS 样本的P53 基因突变率比较具有统计学意义（P=0.041 ，P ﹤0.05 ）。结论：①P16 及 P53 基因突变可能参与 MALT 淋巴瘤的发生与发展，选取的外显子片段位于突 变热点区。②MSI 和 LOH 可能参与 MALT 淋巴瘤的发生与发展。③MSI 与P16 及P53 基因突变之间有相关性，其中D17S798 与P53 基因的关系较 紧密，推测 MSI 可能是MALT 淋巴瘤的早期分子事件之一，当细胞DNA 发生MSI 时，P16 及 P53 基因更加容易发生突变。 关键词：粘膜相关淋巴组织淋巴瘤 P16 基因 P53 基因 微卫星不稳定性 杂合性缺失 2 贵阳医学院2012 届硕士研究生论文 前言 恶性肿瘤的发生是一个多基因多阶段的过程，其机制十分复杂，通常 伴有癌基因的激活、抑癌基因的失活、凋亡信号传导通路的异常以及错配修 复(Mismatch repair system, MMR)基因缺陷导致的微卫星不稳定性 （Microsatellite instability, MSI ）等。这些机制在恶性肿瘤尤其在粘