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贵阳医学院2012 届硕士研究生论文 宫颈癌的差异蛋白表达研究 专 业：儿少卫生与妇幼保健学 研究生：杜典华 导 师：杨国珍 教授 吴春维 副主任医师 摘 要 目的：利用蛋白质组学的方法，获得宫颈癌组织和非宫颈癌组织的差异蛋白 表达图谱。寻找与宫颈癌发生、发展相关的特异蛋白，为探讨宫颈癌 发病机制提供实验室依据。 方法： 1. 选取行宫颈活检且病理组织切片确诊为宫颈癌患者的宫颈组织和非宫颈 癌患者的宫颈组织共11 例。 2. 用17cm、pH3-10 非线性 IPG胶条行第一向等电聚焦，再用12%聚丙烯酰 胺凝胶行第二向SDS电泳，最后用考马斯亮蓝R-250 染色。用UXAM 扫描软件行图像采集，获得宫颈癌组和非宫颈癌组的差异蛋白表达图谱。 经图像软件分析，选取宫颈癌组和非宫颈癌组中表达差异2 倍以上的点 作为差异蛋白点，检测其组间重复性和组内重复性，最终筛选出11 个差 异蛋白点行质谱分析，通过NCBI 数据库检索。 结果： 1. 获得宫颈癌组织和非宫颈癌组织的差异蛋白表达图谱。 2. 比对分析差异蛋白表达图谱，最终筛选出11 个差异蛋白点。以非宫颈癌 组作为对照，在宫颈癌组中表达上调的点6 个 （其中只在宫颈癌中表达 的点2 个），表达下调的点4 个，未检测到的点1 个。 - 3 - 贵阳医学院2012 届硕士研究生论文 3. 差异表达蛋白点经质谱分析和数据库检索，得到了初步鉴定，分别为： 膜联蛋白V、膜联蛋白 I、膜联蛋白A1、膜联蛋白A4、锰超氧化物歧化 酶、转羟乙醛酶、核不均一性核糖核蛋白H2、载脂蛋白A- I、热休克蛋 白、复杂的T-蛋白亚基伽玛亚型。 结论： 1. 通过质谱分析及数据库检索初步鉴定的 10 种蛋白，可能与宫颈癌的发 生、发展有关。 2. 实验结果为进一步探讨宫颈癌的预防、诊断、治疗、病程判断提供实验 室依据。 关键词：蛋白质组学；双向电泳；蛋白质串联质谱；宫颈癌 - 4 - 贵阳医学院2012 届硕士研究生论文 前 言 宫颈癌是女性中仅次于乳腺癌的第二位常见恶性肿瘤。根据统计数据显示， [1] 世界范围内每年新增宫颈癌病例约49.3 万，死亡病例约27.4 万 。我国每年新 [2］ 增宫颈癌病例约 13 万，占全球宫颈癌病例 1/4 以上 。由此可见，宫颈癌严重 威胁着现代女性的健康。 宫颈癌的发生、发展是一个长期、多阶段的过程，具有多基因控制、多因素 调节的复杂性，其在不同的发病阶段且症状出现之前，可能已经在蛋白质水平上 发生了变化，因此从蛋白质整体水平上来揭示宫颈癌的发生、发展是有必要的。 蛋白质组学（proteomics）以蛋白质组为研究对象，分析细胞内动态变化的蛋白 质组组成成分、表达水平及修饰状态，了解蛋白质间的相互作用与联系，从整体 [3] 上分析研究蛋白质的组成及其调控的活动规律 。蛋白质组学在癌症中的研究， [4] 全面的诠释了癌症病变发展的可能分子机制 。 蛋白质组最先是由Wilkins 于1994 年提出的，其主要模式有：完全蛋白质 组学、研究蛋白质之间的相互作用、差异蛋白质组学。差异蛋白质组学是根据样 本在不同时期、不同状态或不同外界条件作用下，所表达的蛋白质不同来鉴定、