白斑综合症病毒胁迫下复方中草药对凡纳滨对虾免疫功能的影响.DOC

doi:10.6043/j.issn.0438-0479.201611008 白斑综合症病毒胁迫下复方中草药对凡纳滨对虾免疫功能的影响 陈辉辉1, 涂晨凌1, 唐杨1, 黄永春1，2* （1. 集美大学水产学院2. 福建省海洋渔业资源与生态环境重点实验室 福建 厦门 361021） 摘要：为研究复方中草药（内含葛根、黄连、金银花、板蓝根、黄芪、甘草、柴胡、当归、山楂、陈皮和茯苓）对凡纳滨对虾（Litopenaeus vannamei）经白斑综合症病毒（WSSV）胁迫后的免疫特性，分别以0%（对照组）0.4%，0.8%，1.2%，1.6%和2.0%复方中草药添加到基础饲料中，连续投喂凡纳滨对虾（体质量0.026±0.007) g）28 d后，测定生长指标并经WSSV感染后测定012，24，48及96 h阶段免疫相关因子（T-SOD、AKP、ACP、GOT、GPT）的酶活性和丙二醛含量，以及观察对虾死亡情况。结果表明，经WSSV胁迫后，凡纳滨对虾总超氧化物歧化酶（T-SOD）、碱性磷酸酶（AKP）、酸性磷酸酶（ACP）、谷草转氨酶（GOT）在0~96 h期间的酶活性表现为先升后降，其中24~48 h达到高峰期。除1.6%添加组对虾的谷丙转氨酶（GPT）在2448 h酶活力较高外，整个实验过程中，0.8%和1.2%添加组对虾的免疫相关酶活力处于较高水平且较其余组稳定，而丙二醛（MDA）含量较低，与其余各组差异显著（p0.05）。感染192 h时，0.8%添加组对虾存活率最高（33.33%）、50%死亡时间最迟(150.50±48.88) h)，1.2%添加组次之（存活率为21.33%，50%死亡时间为127.09±28.10) h），1.6%添加组和2.0%添加组第三，对照组和0.4%添加组则全部死亡，并且50%死亡时间最早，死亡速率也快。复方中草药能提高对虾免疫性能和抗WSSV能力，其中0.8%和1.2%添加量效果最佳。该研究结果可为中草药合理利用和凡纳滨对虾健康养殖提供科学依据。 关键词：凡纳滨对虾；白斑综合症病毒；复方中草药；免疫反应 中图分类号： S945.4+9 文献标志码：A 凡纳滨对虾（Litopenaeus vannamei）是我国三大养殖虾类之一，其养殖产量占全国对虾养殖产量80%，占据重要地位[1]。近年来，由于环境变化，养殖密度及规模扩大，病毒性疾病多发，引发对虾养殖严重的经济损失，其中白斑综合症病毒（WSSV）因传播快、病程短、危害大，死亡率极高，破坏尤为严重，2011年被世界动物卫生组织（OIE）列为必须申报的疾病[2-4]。 由于对虾无特异性免疫系统，无法受外界刺激产生免疫记忆细胞，非特异免疫机制抵御侵染起主导作用，因此对虾病毒性疾病尚无特殊治疗方法，目前主要以防为主，根本措施在于提高对虾自身免疫力和抗病力[5-6]。 中草药因来源于自然，毒副作用小，对促进水产动物生长、抗病力和提高免疫力方面具独特优势，在饵料中添加中草药提高水产动物免疫力，降低发病率已成为近几年的研究热点,现已有200多种中草药作为饲料添加剂用于大规模生产实践中[7]。目前，有关中草药提高对虾抗WSSV性能的研究已时有报道，如印度学者将狗牙根（Cynodon dactylon）、木橘（Aegle marmelos）、心叶青牛胆（Tinospora cordifolia）、胡黄连（Picrorhiza kurooa）以及旱莲草（Eclipta alba）的甲醇萃取物1:1混合投喂对虾，25 d后注射WSSV病毒，发现实验组对虾成活率比无投喂组显著提高[8]；Rameshthangam等[9]将水黄皮（Pongamia pinnata）提取物饲喂对虾4 d后投喂经WSSV感染的对虾肌肉，5 d后成活率达到80%，对照组仅存活6 d；Wu等[10]将2.0 g/kg的紫背天葵(Gynura bicolor)水提物饲喂对虾28 d后注射1.5 ×10 8 cfu/mL弧菌和0.5 ×10 5 copies/mL WSSV， 144 h后发现实验对虾成活率显著高于对照组；Kumaran等[11]将天门冬（Asparagus racemosus）提取物与抗WSSV疫苗混在饲料中投喂对虾30 d后实验对虾抗WSSV侵染能力较对照组大幅提高，其酚氧化酶、溶菌酶和细胞内超氧离子产物等免疫指标显著高于对照组。 在饵料中添加复方中草药提高对虾抗WSSV性能的研究虽时有见报，但有关复方中草药投喂对虾并经WSSV感染后对虾免疫动态变化的研究较少见报，因此本实验按中药组方原则，结合中药配伍目的与禁忌，将抗微生物的中药（黄芩(Radix acutellariae)、葛根(Puerarin)、黄连（Coptidis rhizoma）、金银花(Honeysuck