酵母双杂交系统的改进及研究进展.pdf

海洋湖沼通报 2006 年 　　　　　　　　 No 1 Tran saction s of Oceanolo gy and Limnolo gy 文章编号 (2006) 0 10 10809 酵母双杂交系统的改进与研究进展 张莉1 ,2 ,黄倢1 ( 1. 中国水产科学研究院黄海水产研究所 ,青岛 26607 1 ;2 . 莱阳农学院植物保护系 ,青岛 266 109) 摘要 :酵母双杂交系统是一种新兴的体内研究蛋白质之间相互作用以及筛选 cDN A 文库的 技术手段 , 自建立以来得到了不断的改进与发展 。在此基础上又相继出现了单杂交 、三杂交 、 反向双杂交以及 SO S 富集系统等多种衍生系统 ,它们在功能基因组学 、蛋白质组学以及药物 开发研究中发挥了重要作用 。本文拟就双杂交系统的原理 、改进 、发展及应用做一综述 。 关键词 :酵母双杂交系统 ;单杂交系统 ;三杂交系统 ;反向双杂交系统 ; SO S 富集系统 中图分类号 :TQ920. 1 　　　　文献标识码 :A 随着对多种重要生物的大规模基因组测序工作的完成 ,基因工程领域又迎来了一个新的 时代 —功能基因组时代 ,它的任务就是对基因组中包含的全部基因的功能加以认识 。生物体 系的运作是与蛋白质之间的相互作用密不可分的 ,如 DN A 合成 、基因转录启动 、蛋白质翻译 、 修饰和定位以及信息传导等重要生物过程均涉及到蛋白质复合体的作用 。能够发现和验证在 生物体中相互作用的蛋白质与核酸 、蛋白质与蛋白质是认识它们生物学功能的第一步 。酵母 ( ) 双杂交系统 yea st t wohybrid sy st em 是用于研究蛋白质之间相互作用的一种崭新的、有效 的遗传学方法 。是由 Fiel ds 和 Song[ 1] 在 1989 年首创的 ,它利用转录启动报告基因 , 以已知功 ( ) 能蛋白作为“诱饵蛋白”Bait Prot ein ,从相应的 cDN A 文库筛选出与之相互作用的蛋白,而 不需要蛋白的纯化 , 比以往研究蛋白质之间相互作用的生化技术如偶联 、免疫共沉淀以及亲和 层析等更具有优越性 。经过十多年的发展 , 国外学者又创立了基于双杂交原理的新系统如单 杂交系统 、三杂交系统 、反向双杂交系统以及核外双杂交技术等 ,使人们对研究生物大分子之 间的相互作用扩展到蛋白质与核酸之间以及核酸与核酸之间。其功能也被推广到细胞周期调 控 、信号转导 、肿瘤基因表达等多个研究领域 ,它在水产养殖病害防治中也得到了越来越广泛 的应用 。 1 　酵母双杂交系统的基本原理 酵母双杂交系统的产生是基于对真核细胞转录启动因子如酵母转录因子 GAL 4 性质的 研究 。其原理如 图 1[ 1] 所示 : Gal4 蛋 白可识别专一的位点 U A SG ( up st ream activation se ( ) ( ) 基金项目: 国家重点基础研究发展规划项目课题资助 G19990 12002 、国家 自然科学基金项 目 3027 1020 、青岛市自 ( ) ( ) ( 然科学基金项 目 032J ZP10 、山东省自然科学基金项 目 Q2002D02 和中国水产科学研究院科研基金项 目 2003 青6) 共同资助 通讯作者 :黄倢 ,博导 ,研究员 。从事海洋生物病毒学研究 Tel : 0532 - Email :aqudi