辛酸沉淀-凝胶过滤法提取猪血清IgM.pdfVIP

4卷 髑 阜阳师范学院学报(自然科学版) Vol。24。No。4 2007年12月 journal of Fuyang Teachers College(Natu ral Science) Dec．2007 辛酸沉淀一凝胶过滤法提取猪血清IgM 刘生杰 。，周 杨 ，朱茂英 ，聂传鹏 ，李东伟 ，余为一 (1阜阳师范学院生命科学学院，安徽阜阳 236041；2安徽农业大学生命科学学院，安徽合肥 231072) 摘 要：使用辛酸沉藏～凝胶过滤法提取猪血清中免疫球蛋白IgM，并通过其纯度鉴定等探讨提纯效果。通过辛酸沉 淀法粗提免疫球蛋白，再结合Sephadex G200凝胶过滤法纯化获得IgM，利用SDS—PAGE电泳法和AlphaEaseFC凝 胶成像分析软件测定其分予量和纯度、Bradford法测定提取蛋白浓度并计算其得率．结果显示辛酸粗提能够去除大 部分杂蛋白，凝胶过滤获得两个洗脱峰，其中第一峰通过电泳鉴定含有IgM，纯度63。8 ，得率1。28 mg／ml血清．利 用辛酸沉淀一凝胶过滤法能够获取纯度和得率都较高的IgM，纯度可满足普通要求的实验和应用。 关键词：猪血清；免疫球礓白M(IgM)；提取；纯化 中图分类号：Q81；s85 文献标识码：A 文章编号：1004—4329(2007)04—0022—04 猪血清中免疫球蛋白IgM是猪感染免疫初期首 的顺序也介于大、／J、分子之间．这样待分离样品经过 先应答的免疫球蛋白，它的含量高低能反映猪的感 层析后，分子便按照从大到小的顺序依次流出，达到 染状况和免疫抗性高低，分离纯化IgM可用于相应 分离不同分子量物质的目的 引。 疾病的早期诊断和免疫学研究[_j』．虽然IgM的分离 l 仪嚣与试剂 和纯化方法育很多种，包括各种沉淀法和层析法，但 由于猪的血清中含有很多杂蛋白，采用一‘步纯化法 1．1 仪器 不可能得到纯度较高的IgM抗体L。J。经典的方法多 高速离心机，透析袋，玻璃层析柱(1 cm×100 采用硫酸铵分部盐析后凝胶过滤，硫酸铵具有溶解 cm)，层析系统，核酸蛋自检测仪(WZ一9O一1型)，电 度大且随温度变化小，价恪低廉等优点。。]，但由于硫 泳槽，摇床，分光光度计，Eppendorf移液器，磁力搅 酸铵盐析步骤多、损失大，IgM在血液中含量本来就 拌器，震荡器，电泳仪(北京君义)、AlphaEaseFC凝 低，所以探索其他更为便捷的方法是大髭获得IgM 胶成像分析系统。 的共同愿望。文章通过辛酸沉淀法和凝胶过滤法纯 1．2 试剂 化猪血清中IgM抗体，试图在获取高纯度、高得率 乙酸，乙酸钠，辛酸，Sephadex G200，Tris，丙烯 IgM的同时对IgM纯化方法作初步探讨。 酰胺，甲叉双丙烯酰胺，SDS，甘氨酸，过硫酸铵，甲 辛酸为短链脂肪酸，辛酸沉淀法原理是在酸性 醇，冰醋酸，考马斯亮蓝R一250，Bradford试剂盒， 条件下辛酸可沉淀腹水和血清中的非Ig蛋白 ]．而 PBS(pH 7．2 ～7．4)． 凝胶过滤法主要是根据多孔凝胶对不同半径的蛋白 2 材料与方法 质分子具有不同的排阻效应实现的．对于某种型号 的凝胶，一些大分子不能进入凝胶颗粒内部而完全 2．1 材料 被排阻在外，只能沿着颗粒间的缝隙流出柱外；而一 猪新鲜血液(采自阜阳市颖南屠宰场) 些小分子不被排阻，渗透进入凝胶内部的筛孔，尔后 2．2 方法 又被流经的洗脱液带走；巾等大小的分子只能进入 2．2．1 常规方法制备血清． 一 部分凝胶较大的孔隙，因此这些分子从柱巾流出 2．2．2 IgM的粗提 收稿日期：2007—09—11 基金资助：国家自然基金项目(30671 537)；安徽甫教育厅教学研究项目(2007jyxm345)；阜阳师范学院自然科学青年项目