荧光定量PCR检测牛乳中金黄色葡萄球菌耐热肠毒素A基因.pdfVIP

摘 要 目的建立荧光定量PCR检测牛乳中产肠毒素A基因的金黄色葡萄球菌的 方法。 方法 以金黄色葡萄球菌耐热肠毒素A保守序列为目标，根据GenBank公 布的金黄色葡萄球菌SEA基因序列，设计了2对引物。在对临床分离的金黄色 葡萄球菌基因组DNA测序正确后，在鉴定其特异性及灵敏度的基础上建立了检 测牛乳中金黄色葡萄球菌肠毒素A基因的荧光定量PCR检测方法。 结果成功克隆了金黄色葡萄球菌SEA基因保守区序列。全序列由774个 碱基构成，克隆序列与Genbanl【公布参比序列相似性达到了99％。荧光定量检 测引物的特异性良好，标准曲线符合要求，灵敏度水平也达到49．5龟。对人工污 染的牛乳中含SEA的金黄色葡萄球菌的检测结果显示，检出细菌检测限为 200CFU／mL。 结论成功克隆牛源金黄色葡萄球菌SEA序列，并建立了快速检测牛乳中 含SEA的金黄色葡萄球菌的荧光定量PCR方法，为快速检测牛原料乳中含有肠 毒素A基因的会黄色葡萄球菌提供了有效的技术支撑。 关键词：金黄色葡萄球菌；耐热肠毒素A基因；核酸染料：荧光定量PCR ■ of aureus DeteCtion heat-resistant Qu觚titative Staphylococcus ill enterotoxiIlA MilkReal—timePCR gene by AbSt陀ct of Establishment PCRdctectionof Objective qu锄titative Staphyl0：C0ccus 卸reus锄terotoxinA inMill【． gene Methods t0tlle of SEA Accordinggenc sequenceStaphylococcIls她rcus dcclared theDNAof aurcus锄d 2 GenB孤l【’collect by Staphylococcusdesi朗ed pairs of SEA PCR．Aner the 0f gcne primers．AmpIifieby sequencin舀testspecificity withReal-tiIne buildthe standard sct thc PC＆锄d up cun，e，then primer up testing method． Results aureusenterotoxinA cIoned． Staphylococcus genew弱successfully SEA c0骼istSof774baSc the