教学大肠菌群检测概要1.ppt

矿泉水中大肠菌群的测定 一、实验目的 1、了解大肠菌群在食品检验中的意义 2、掌握矿泉水中大肠菌群的检验原理和测定方法； 3、熟练稀释分离和无菌操作技术 二、实验原理 大肠菌群系指一群能发酵乳糖，产酸产气，需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。该菌主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便指标来评价食品的卫生质量，并推断食品是否污染肠道致病菌。 食品中大肠菌群数是指以1毫升（或1克）检样中大肠菌群最可能数（MPN）来表示。本实验依据GB 4789.3-2010制定。 三、设备和材料 设备： 恒温培养箱、冰箱、恒温水浴锅、电子天平、均质器、振荡器、无菌吸管、无菌锥形瓶、无菌培养皿、菌落计数器、PH试纸、接种环、杜氏小管、试管等。 培养基和试剂： 月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤（LST）、煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）、无菌生理盐水、NAOH和HCL标准溶液。 四、操作步骤： 1、液体样品:以无菌吸管吸取25mL样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶中振摇,充分混匀,制成1∶10的样品匀液。 2、样品匀液的PH值应在6.5~7.5之间，必要时可用标准溶液调节PH值。 3、用1mL 无菌吸管或微量移液器吸取1∶10样品匀液1mL,沿管壁缓缓注入9mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌试管中(注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面),振摇试管或换用1支1mL无菌吸管反复吹打,使其混合均匀,制成1∶100的样品匀液。 4、根据对样品污染状况的估计,按上述操作,依次制成十倍递增系列稀释样品匀液。每递增稀释1次,换用1支1mL无菌吸管或吸头。从制备样品匀液至样品接种完毕,全过程不得超过15min。 （二）初发酵试验 每个样品,选择3个适宜的连续稀释度的样品匀液(液体样品可以选择原液),每个稀释度接种3管月桂基硫酸盐胰蛋白胨(LST)肉汤,每管接种1mL，36℃± 1℃ 培养48h±2h,观察倒管内是否有气泡产生，产气者进行复发酵实验，未产气者为大肠菌群阴性。 （三）复发酵实验 用接种环从产气的LST肉汤管中分别取培养物1 环,移种于煌绿乳糖胆盐肉汤(BGLB)管中, 36℃±1℃培养48h±2h,观察产气情况。产气者,计为大肠菌群阳性管。 五、实验报告 （一）实验数据记录： 将初发酵结果、复发酵结果填入实验数据表格中； （二）大肠菌群最可能数（MPN）的报告确证的大肠菌群BGLB阳性管数,检索 MPN表(见附录B),报告每g(mL)样品中大肠菌群的MPN值。 样品名称 接种量 初发酵（LST） 复发酵（BGLB） MPN/ml(g) 矿泉水 10ml 1ml 0.1ml 大肠菌群实验数据记录 根据初发酵和复发酵产气情况填写表格，产气记为“+”；不产气记为“—”，最后根据产气管数对照MPN表格得出最后的结论。 10版MPN表 03版MPN表 食品微生物学检验  大肠菌群计数（GB 4789.3-2010 ） 大肠菌群的定义 大肠菌群系指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。 大肠菌群不是细菌学上的分类命名，而是根据卫生学方面的要求，提出的与粪便污染有关的细菌，即作为食品、水体等是否受过人畜粪便污染的指示菌，根据进一步的生化试验，可将这群细菌再分为大肠艾希氏菌（俗称大肠杆菌）、弗氏柠檬酸杆菌、肺炎克雷伯氏菌和阴沟肠杆菌等。 大肠杆菌的定义 大肠杆菌（也称大肠埃希氏菌），分类于肠杆菌科，归属于埃希氏菌属。 与人类有关的大肠杆菌统称为致泻性大肠杆菌，包括五种：肠毒素性大肠杆菌（ETEC）、致病性大肠杆菌（EPEC）、出血性大肠杆菌（EHEC）、侵袭性大肠杆菌（EIEC）、黏附性大肠杆菌（EAEC）。 卫生学意义 大肠菌群和大肠杆菌是评价卫生质量的重要指标，作为食品中的粪便污染指标。 食品中检出大肠菌群，表明该食品有粪便污染，既可能有肠道致病菌存在，因而也就有可能通过污染的食品引起肠道传染病的流行。大肠菌群数的高低，表明了粪便污染的程度，也反映了对人体健康危害性的大小。 1 范围 本标准规定了食品中大肠菌群（Coliforms）计数的方法。 本标准适用于食品中大肠菌群的计数。 2 术语和定义 2.1 大肠菌群 :在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。 3 设备和材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下： 恒温培养箱：36 ℃±1 ℃。 冰箱：2 ℃～5 ℃。 恒温水浴箱：46 ℃±1 ℃。 电子天平：感量 0.1 g。 均质器、振荡器、接种环 无菌吸管：1 mL（具 0.01 mL 刻度）、10 mL（具 0.1 mL 刻度）或微量移液器及吸头。 无菌锥形瓶：容量 500 mL。 无菌培养皿：直径 90 mm。 杜氏小管 pH 计或 pH 比色管或