高效液相色谱法（HPLC）摘要.pptVIP

高效液相色谱法 （HPLC）;色谱法定义;目 录;一、液相色谱分析法的发展;类比 液柱色谱法和跑道赛跑;二、液相色谱分析法的特点;高效液相色谱法的突出特点： 1）高压（150－350*105Pa） 2）高速 3）高效 4）高灵敏度（高灵敏度的检测器：紫外10-9g，荧光 10-11g ） ;三、液相色谱仪（1）;三、液相色谱仪（2）;四、液相色谱分析法的原理;四、液相色谱分析法的原理;;操作过程图示 ;四、液相色谱分析法的原理;五、高效液相色谱法的主要类型及原理;1、液-液分配色谱;2、液-固吸附色谱;举例： 苯乙胺类药物中重酒石酸去甲肾上腺素注射液的高效液相色谱测定法。 色谱条件与系统适应性试验：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.14%更烷基磺酸钠溶液——甲醇(65:35)，用磷酸调节PH值至3.0作为流动相；流速为每分钟1ml；检测波长为280nm。理论板数按重酒石酸去甲肾上腺素峰值计算应不低于3000。 ;反相高效液相色谱法;举例：巴比妥类药物 苯巴比妥、苯妥英和卡马西平均为临床上常用的抗癫痫药，其药物浓度与疗效和毒副反应密切相关。临床上常将三种药物同时使用，为提高疗效，减少毒副作用与个体差异，为超剂量中毒诊断、治疗与及时调整给药方案提供科学依据，临床上要进行血药浓度检测，而高效液相色谱法是最常用的方法之一。 ; 乙腈(jīng)又名甲基氰，分子式CH3CN，无色透明液体，密度小于水，约为0.79，能与水、乙醇等有机溶剂以任意比混溶，易燃，有毒性。;3、离子交换色谱;4、离子对色谱;举例：维生素类药物的分析 维生素具有脂溶性和水溶性两大类，由于其化学结构和性质相差较大，在含水介质中，又要受到光、空气、温度和pH的影响，使测定结果不理想。因而，提出用甲醇和水都能溶解的樟脑磺酸，作为离子对试剂，以二巯基丙烷磺酸钠0.125g/ml作为抗氧化剂，能使被测样品处于稳定的初始状态，结果更为可靠。 ;反相离子对色谱 是分离有机离子的有效方法，离子对试剂和其他添加剂的选用规则：1.样品中含有—COOH,—SO3H基团时，选用的离子对试剂应是带正电荷的有机铵盐，以增加???品阴离子在反响色偶中的保留值，选用的流动相一般是甲醇/水；2.除了加入离子对试剂，还要加入磷酸盐或者其他缓冲液，以控制流动相的酸度；3.样品中含有—NH2和—NH基团或其他阳离子时，选用的离子对试剂应是烷基磺酸盐或硫酸盐；4.样品同时含有—NH2，—COOH,—SO3H等不同性质的基团时则以上规则选用的离子对试剂和添加剂都合理。;举例：芳酸及其酯类药物分析 合成氨基水杨酸钠时，以间氨基酚为原料的生产路线较为普遍，因此在成品中可能含有未完全反应的间氨基酚。USP(24)采用离子对高效液相色谱法检测间氨基酚的限量。 色谱条件：填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶(C18,10um)；色谱柱为250mmX46mm；流动相为磷酸二氢钠液(0.05mol/L)—磷酸氢二钠液(0.05mol/L)—甲醇(含氢氧化四丁基铵1.9g)(425:425:100)；检测波长为254nm；流速为1.5ml/min。 ;5、离子色谱; 阳离子交换：R—H + Na+OH- ＝ R—Na + H2O R—H + Na+Br- ＝ R—Na + H+Br- 阴离子交换：R—OH + Na+Br- ＝ R—Br + Na+OH- 使具有高背景电导的流动相转变成低背景电导的流动相，从而用电导检测器可直接检测各种离子的含量。这种色谱技术称为离子色谱。 若样品为阳离子，用无机酸作流动相，抑制柱为高容量的强碱性阴离子交换剂。;双柱型离子色谱装置图;6、空间排阻色谱;7、亲和色谱(AC);;流动相选择该注意的几点问题;液相色谱分离类型参考表;六、高效液相色谱分析法的应用;1、高效制备液相色谱在天然产物分离中的 应用 天然产物（主要是中药）种类繁多,所含化学成分种类丰富,且有不少结构相似而含量高低不一, 采用常规方法难以进行分离、 精制。而 HLPC的高灵敏性和高效性使其能有效地分离纯化某些天然产物中的有效成分。如表2列出的便是其中几种。 已有文献对利用HLPC分离一些天然产物进行了报道，如黄酮类化合物（如下表所示）、苷类化合物、有机酸类化合物和生物碱类化合物等等。;2、液相色谱技术在农药残留检测中的应用 液相色谱法是一种经典的分析方法 由于其具有操作简便分析速度快分离效能高 灵