第12章制备型高效液相色谱汇编.pptVIP

待分离成分呈单一主峰 不易分开的两组分 目的组分含量少 第三节 实验条件的选择 色谱柱的选择与填装 柱填料 流动相选择 检测器的选择 仪器设备 一、柱的选择和装填 柱： 不锈钢柱： 200kg ，生物适应性差 玻璃柱：10～15kg 聚合物柱： 装填： 当粒度小于20μm，用较大的匀浆罐湿法填装。粒度大于30μm时；利用轻敲柱外壁的干填法 二、柱填料 硅胶： 葡聚糖和琼脂糖： 高分子聚合物： 颗粒大小 在α很小的分离制备中，要求较高的N值，宜用小粒度的填装柱。 当α很大时，用大颗粒填装柱，对过载进样是有好处。 三、洗脱剂 可利用相同填料的分析柱，选择最适合于分离目的和要求的流动相的组成（如溶剂的配比，离子强度，pH等），将其直接或略加修改后用于制备分离 一般不采用梯度洗脱 选择合适的溶剂溶解样品 采用色谱纯的试剂 四、仪器设备 对泵的精密度和准确度要求不高（ 0.01～100mL/min ） 对检测器的高灵敏要求不高 流路系统尽可能用惰性聚合材料 柱外效应试验结果影响较小 第四节 操作变量的确定 一、样品的进样量 宜注射低浓度大体积的样品，不宜注射高浓度小体积的样品。 样品进样的体积与柱的内径、柱长、流动相和固定相的类型、样品的溶解性以及分离目的有关。 柱内径，mm 困难的分离（α＜1.2），mg 容易的分离（α＞1.2），mg 2