苹果MdCBL3基因的克隆及功能鉴定.pdf

园艺学报，2017 ，44 (1) ：1 –10. Acta Horticulturae Sinica doi ：10.16420/j.issn.0513-353x.2016-0489；http ：//www. ahs. ac. cn 1 苹果MdCBL3 基因的克隆与功能鉴定 刘亚静，马齐军，李浩浩，路 静，郝玉金，由春香* （山东农业大学园艺科学与工程学院，作物生物学国家重点实验室，农业部黄淮地区园艺作物生物学与种质创制重 点实验室，山东泰安 271018 ） 摘 要：从‘嘎拉’苹果（Malus × domestica Borkh. ）中克隆MdCBL3 （序列号：MDP0000155124 ）， 长 852 bp。系统进化树分析表明，苹果MdCBL3 与白梨亲缘关系最近。利用 PlantCare 数据库进行启动子 顺式作用元件预测分析，MdCBL3 启动子序列中存在干旱、低温、光、生长素、防御等响应元件。构建 MdCBL3 表达载体并利用农杆菌介导法侵染苹果愈伤组织和拟南芥。半定量 RT-PCR 证明 MdCBL3 在转基 因愈伤组织中过量表达，在拟南芥中得到异源表达。表型分析发现，在盐胁迫中，与野生型相比，转基 因愈伤组织和拟南芥成龄苗生长更好，盐胁迫的抗性更强。在拟南芥中异源表达MdCBL3 ，能提高拟南芥 对干旱和低温的抗性。 关键词：苹果；MdCBL3 ；基因克隆；功能鉴定；盐胁迫 中图分类号：S 661.1 文献标志码：A 文章编号：0513-353X （2017 ）01-0001-10 Molecular Cloning and Functional Characterization of MdCBL3 in Apple * LIU Yajing ，MA Qijun ，LI Haohao ，LU Jing ，HAO Yujin ，and YOU Chunxiang （State Key Laboratory of Crop Biology ，MOA Key Laboratory of Horticultural Crop Biology （Huanghuai Region ）and Germplasm Innovation，College of Horticulture Science and Engineering，Shandong Agricultural University ，Tai’an， Shandong 271018 ，China ） Abstract ：A gene named MdCBL3 （MDP0000155124 ）was cloned from ‘Gala ’apple （Malus × domestica Borkh. ）. The length of MdCBL3 was 852 bp. A phylogenetic tree analysis indicated that the Pyrus bretschneideri exhibited the highest sequence similarity to MdCBL3. The promoter’s cis-acting elements were analyzed and predicted using PlantCare Databases，analysis showed that the MdCBL3 promoter sequence included drought，low temperature ，light，auxin，defense responsiveness etc. Construct expression vector of MdCBL3 and use Agrobacterium mediated method to infect apple c