抗-Hu抗体相关PNS患者外周血单个核细胞的增殖反应及对SCLC细胞的抑制作用.pptVIP

抗-Hu抗体相关PNS患者外周血单个核细胞的增殖反应及对SCLC细胞的抑制作用 研究背景 副肿瘤性神经系统综合征(paraneoplastic neurological syndromes，PNS)是与肿瘤有关的神经系统综合征,既非肿瘤的直接侵犯,也不是由于癌肿导致的代谢障碍、恶病质及放疗和化疗等并发症引起的。 小细胞肺癌（SCLC）最常见。 发病机制尚未明确。 副肿瘤综合征相关抗体 anti-Hu 抗体 anti-Amphiphysin抗体 anti-VGCC 抗体 anti-Yo 抗体 anti-Ri 抗体 发现某些可以检测出低滴度anti-Hu抗体的小细胞肺癌（SCLC）患者肿瘤预后优于anti-Hu抗体阴性的患者 部分PNS 患者的肿瘤病灶较局限且只播散至局部淋巴结 既往研究在体液免疫方面取得一定进展。发现了大量抗体，包括细胞核抗体，和细胞膜抗体。 细胞免疫研究较少。 研究目的 实验流程 结 果 CFSE原理 羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯(CFSE) 是非极性分子, 扩散进入细胞与赖氨酸发生偶联,形成稳定的大分子荧光结合物。当细胞分裂时,荧光结合物平均分配到两个子细胞中,而荧光强度为亲代细胞的一半。在一个增殖细胞群体中,连续各代细胞的荧光强度表现为二倍递减的特征 CFSE测增殖原理示意图 正常组 组内比较 PNS组以及SCLC组PBMC单独培养和混合培养增殖指数无显著差异 PNS组以及SCLC组H446单独培养和混合培养增殖指数无显著差异 三组间混合培养后比较 一. 增殖与抑制作用 H446细胞能使正常组总PBMC、CD4+ T细胞、CD8+ T细胞细胞增殖加快，同时正常组PBMC能抑制H446细胞生长。 SCLC患者和PNS患者均未出现类似情况。 提示体外共同培养时PNS患者PBMC不能抑制NCI-H446细胞的生长。 肺癌患者外周血中CD4+ T细胞减少, CD4+ /CD8+下降，肺癌患者免疫功能处于抑制状态。 本课题的另一研究显示PNS患者外周血也存在CD4+ T细胞减少，CD4+ /CD8+下降，PNS患者免疫功能也有一定程度的抑制。 PNS患者外周血中存在针对肿瘤抗原的致敏的特异性T淋巴细胞。 但其总体免疫功能仍处于低下状态，细胞增殖能力较差。 体外培养时不能对肿瘤细胞产生明显的抑制作用。 二、培养后CD4+CD8+比例变化 如果存在致敏的抗原特异性T淋巴细胞，这部分细胞体外经刺激后可能会优先克隆扩增， H446混合培养，PNS患者培养后CD4+ T细胞比例明显高于正常人。 提示PNS患者体内致敏的特异T细胞以CD4+T细胞为主。 抗-Hu抗体与PNS发病密切相关。 且研究提示HuD 蛋白是自身反应性的CD4+ T细胞的抗原性靶目标。 提示CD4+ T细胞在抗肿瘤免疫的同时直接参与了细胞介导的神经系统的损伤。 病理显示，PNS患者脑干、脊髓大量炎性淋巴细胞在血管周围呈袖套样浸润。 Dalmau等发现血管周围的炎性淋巴细胞主要为CD19+ B细胞和CD4+ T细胞。 和我们的研究结果相似，提示PNS患者中枢神经系统和周围神经系统中抗原特异性T细胞均以CD4+ T细胞为主。 CD4+ T细胞分泌IL - 2、TNF和INF等多种细胞因子、具有特定的杀伤功能、能维持免疫记忆而成为体内免疫调节的核心。 目前研究认为CD4+ T细胞在抗肿瘤免疫中起重要作用。 本次实验显示PNS患者体内致敏的特异T细胞以CD4+ T细胞为主。 CD4+T细胞在抑制肿瘤的生长、改善PNS患者预后以及攻击神经元产生各种PNS症状方面起了重要作用。 ★PNS患者PBMC对H446细胞生长无抑制作用。 提示PNS患者总体免疫功能处于抑制状态。 PNS患者体内致敏的特异性的T细胞以CD4+T细胞为主。 结论一 结论二 * * 肿瘤细胞 神经细胞 共同抗原 神经细胞 肿瘤细胞 共同抗体 致敏抗原特异性T细胞 观察 PNS 患者PBMC能否抑制肿瘤细胞的增殖 。 PNS 患者的PBMC中是否存在针对肿瘤抗原致敏的特异性淋巴细胞 特异性致敏淋巴细胞以那种T细胞亚群为主 观察经肿瘤细胞刺激后CD4+细胞CD8+细胞比例的变化 PBMC与H446混合培养 共同培养 T亚群染色 PBMC分离培养 H446细胞 培养 CFSE染色 CellQuest 分析亚群比例 ModFit 分析各细胞增殖指数 ABC 、Western blot 筛选Hu抗体阳性PNS患者 1 100 50 25 2 100 100 1 2 25 50 50 50 25 50 1 2 100 50 25 25 CD4+T细胞增殖动力学 CD8+T细胞增殖动力学 H446单独增