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第 一 篇 组织培养技术 第 一 章 绪论和基本理论知识 第一节 绪 论 一、组织培养基本概念 组织培养（Tissue Culture）指的是从体内取出组织摹拟体内生理环境，在无菌、适 当温度和一定营养条件下，使之生存和生长并维持其结构和功能的方法。细胞培养（Cell Culture）用的也是同样方法，培养物是单个细胞或细胞群。在培养组织过程中，现代的 培养技术尚不能在体外长期维持组织的结构和机能长期不变，因此在进行培养时，不论 培养物是组织或细胞都要生活在人工环境中。生存环境的改变，加上细胞的移动（运动） 和其它一些影响，培养时间过长，特别是反复传代，很容易导致细胞发生变动或出现单 一化现象，即趋向于变成单一类型细胞，最终便也成了细胞培养。另外所谓细胞培养， 也并不意味细胞彼此是独立的。细胞在培养中的生命活动和在体内时一样，仍然是相互 依存的，呈现着一定“组织”特性。所以，组织培养和细胞培养并无严格区别。因此在 本书的叙述中，这两个词将作为同义语使用。 所谓器官培养（Qrgan Culture），指的是应用和组织培养相似的条件，培养的是器官 的原基、器官的一部分或整个器官，使之在体外生存、生长和保持一定功能的方法。以 * 上三个层次的培养，又可统称之为体外培养（In Vitro ） 。详见图1- 1。 细胞培养 体外培养 — 组织培养 器官培养 * In Vitro 原意为在试管中，即体外之意。 图1- 1 体外培养种类 二、对组织培养的评价 组织培养不仅是一种技术，也是一种科学。从广义上说组织培养分为动物组织培养 和植物组织培养两大类，本书是以叙述动物特别是人体组织培养为主的。被用于组织培 养的细胞或组织是非常好的实验对象。组织培养在现代医学和生物科学研究中应用极为 广泛，这与其有一系列优点是分不开的： ①能长时间直接观察活细胞的形态结构和生命活动；可用于细胞学、遗传学、免疫学、 实验医学和肿瘤学等多种学科的研究工作。 ②便于使用摄影、摄电影和闭路电视等方法进行记录，能直接观察细胞变化。 ③可供研究的细胞种类极其广泛，从低等生物到高等生物，以及人类；从胚胎到成体； 从正常组织到肿瘤细胞，皆可用于培养。 ④便于使用各种不同的技术方法，如相差显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、组织化学、 同位素标记等等观察和研究细胞。 ⑤培养细胞携带有与体内细胞同等的基因组（Genome ），也是分子生物学和基因基因学 的研究对象；细胞培养技术已是分子生物学和基因工程的重要组成部分。 ⑥易于施用物理、化学和生物因素等进行实验研究。 ⑦可同时提供大量生物性状相似的实验对象，耗资少，比较经济。 ⑧已成为生物制品、单克隆抗体生产和基因工程制品等的生产手段。 当然，组织培养做为一种技术，也有其不足。主要是组织和细胞离体以后，独立生 存在人工培养环境中，即使当前模拟体内技术发展很快，但与体内环境相比，仍有很大 差异。因此在利用培养细胞做实验对象时，不应视为与体内细胞完全一样，把实验结果 外推至体内，轻易做出与体内等同的结论。 组织培养仍在发展中，很多技术日臻完善，随分子生物学、基因工程的不断发展和 对细胞分化认识的日益深入，我们相信，最终必能创出与体内更加相似的条件，使组织 培养的应用价值更大。 三、组织培养发展简史 一切事物都有一个由简单到复杂的发展过程，对组织和细胞的研究经历了四个世 纪；其中组织培养的发展也经历近百年时间。回顾这些历程，不仅增加些常识，也可能 从中得到一些启迪，利于推动这一技术向更高水平迈进。早期组织培养，据文献记载， 最早是德国人Roux （1885）曾用温生理盐水在体外培养鸡胚组织并使之活了数月之久， 这被认为是组织培养的萌芽试验。1903 年Jolly 用盖片悬滴培养法，培养蝾螈白细胞生 活了近一个月。1906 年Beebe 和 Ewing 用同样方法以动物血清做培养基，培养狗淋巴 细胞存活了 7