第十三章转基因植物.DOC

第十三章 转基因植物 转基因植物研究进展 自20世纪80年代初首次成功获得转基因植物以来，植物遗传转化发展速度十分迅猛，基因工程技术日新月异。在近20年时间内，已经有35个科的120多种植物转基因获得成功。世界上有45个国家已经完成或正在进行转基因作物田间试验，已超过25 000例，涉及60种作物的10类经济性状的改造（雷茂良，1998）。至今，全世界部分国家的大豆、玉米、棉花等农作物已经开始大量使用转基因技术。 转基因作物大规模生产并商品化是在1996年左右。目前，发达国家转基因作物的种植面积比发展中国家要大得多，主要集中在美国、阿根廷、加拿大、澳大利亚和墨西哥，其中美国是世界上主要的转基因作物种植国。2001年全球转基因作物种植面积已近5 260.6万公顷（其中美国转基因作物种植面积接近3/4），比2000年增加19%，比1996年转基因作物种植面积增加了30倍。总之，转基因植物的种植面积一直呈上升趋势。在美国，转基因作物现已成为其农作物的主流。据估计，2002年，转基因玉米种植面积占美国玉米总种植面积的32%，转基因大豆种植面积占大豆总种植面积的74%，而转基因棉花种植面积已占棉花总种植面积的71%。 目前，全球转基因作物的种类主要有大豆、玉米、棉花和油菜等，这四类作物占全部转基因植物的 86%，其中有 75% 种植在北美。就转基因作物的性状而言，主要有抗除草剂、抗虫、抗病等几类。世界上转基因作物种植面积较多的是抗除草剂大豆（占转基因植物总面积的40%）、抗虫玉米（占23%）、抗病烟草（占13%）、抗除草剂油菜（占10%）、抗虫棉花（占8%）、抗除草剂棉花（占3%）。 我国转基因植物的研究也在迅速发展，一些转基因植物也已商品化。到2000年底，我国抗虫棉种植面积达37万公顷，减少农药用量达80% 左右。这与世界上主要发达国家如美国相比还有很大差距，但我国转基因方面研究的发展速度在加快。 转基因在作物品种改良中的应用 抗虫 抗病毒 抗病 抗非生物胁迫 抗除草剂 改良作物品种 改变花的颜色和形状 转基因植株作为生物反应器 植物转基因方法 自20世纪80年代初第一例转基因植物问世以来，分子生物学技术的进展推动了植物基因工程的飞速发展，目的基因的分离与克隆、转化手段的创新、检测方法的改进以及转基因表达与遗传稳定性的研究等都取得了重大突破。 目前，用于植物遗传转化的方法主要为载体法和非载体法。载体法是以农杆菌（Agrobacterium）Ti质粒和Ri质粒为介导的方法，适用于双子叶植物和少数单子叶植物的遗传转化。非载体法是通过各种物理和化学等手段，将DNA直接导入受体细胞进行遗传转化，主要包括基因枪法、PEG法、电激法、脂质体法、显微注射法、激光微束法、超声波法、碳化硅纤维法、电离子透入法及花粉管通道法等。与农杆菌介导的载体法相比，DNA直接导入法目前虽然转化频率不高，但一般不受受体植物限制，尤其是基因枪有利于禾谷类作物遗传转化，是继农杆菌介导转化法后又一被广泛应用的遗传转化技术。图8.1和图8.2分别描述了基因枪法和农杆菌介导法水稻遗传转化过程。 图8.1 水稻基因枪法遗传转化过程 （Bec，et al，1995） 图8.2 水稻农杆菌（Agrobacterium tumefaciens）介导法遗传转化过程 （Breitler，et al，1997） 一、基因枪法 1. 基因枪的发展与转化原理 1987年，美国康乃尔大学Sanford等设计制造了世界上最早的火药式基因枪。其基本原理是将外源DNA通过亚精胺和氯化钙的沉积作用包被在金属颗粒（金粉、钨粉等）表面，形成微弹；将微弹悬液涂于载膜（尼龙、塑料等）上，以不同的驱动力高速驱动微弹载体，使携带DNA的微弹穿透植物细胞壁，直接进入受体靶细胞，进行遗传转化（见图8.3和图8.4）。 a b 图8.3 固定式与手持式基因枪 图8.4 基因枪结构示意图 根据驱动力的不同将基因枪分为火药爆炸式基因枪、高压气动式基因枪和高压放电式基因枪。 火药爆炸式基因枪是世界上最原始的基因枪类型，它利用弹膛中火药爆炸产生的动力驱动微弹载体高速运动，载体抵达弹膛末端被带孔挡板拦截，而微弹由于惯性继续高速运动击中靶细胞（Klein，et al，1987）。这种基因枪结构简单，成本低，但射击深度及粒子分布不易控制，并使受体细胞损伤较大。 高压放电式基因枪利用通过高压放电引起水滴汽化所产生的冲力，驱动微弹载体加速运动，当载体膜被阻挡网阻挡后，微弹通过阻挡网继续运动，携带外源DNA直接轰击真空室中的靶细胞或靶组织（Christou，et al，1990）。这种基因枪可以精确调控微弹运动速度和射入深度，有效射入具有再生能力的细胞层，减