第四章讨论.PDF

第四章 討論 36 已有實驗研究證實 ，病毒在感染 、吸附的初步階段 ，病毒能藉由病毒外 套膜與宿主細胞表面的接受體 〈receptor 〉作用引發細胞凋亡的訊息傳遞 ，例 如家禽白血病腫瘤病毒〈 avian leukcosis-sarcoma virus 〉可以藉由與 TNF receptor–related protein 〈CAR1 的結合促進細胞死亡訊息的傳遞 〉 (Brojatsch et al., 1996);呼腸孤病毒〈reovirus 〉則可以與junction adhesion molecule (JAM) 和 sialic acid 結合促進細胞凋亡訊息的傳遞 (Barton et al., 2001; Connolly, Barton, and Dermody, 2001) 。一些不具感染性的病毒與宿主細胞表面接受體的 吸附也顯示可能引發前細胞凋亡〈 proapoptotic 〉，包括reovirus (Tyler et al., 1995) 、vaccinia virus (Ramsey-Ewing and Moss, 1998) 、第二型單純皰疹病毒 〈herpes simplex virus type II, HSV 〉 (Hanon et al., 1998) 和人類免疫不全病 毒〈human immunodeficiency viruses, HIV 〉 (Esser et al., 2001) 。在 本實驗中， 我們已經證實紫外光 〈ultraviolet irradiation, UV 〉照射導致複製能力缺陷的日 本腦炎病毒顆粒〈UV-JEV 〉可以藉由 ROS 〈圖六〉及NF-κB 〈圖八及九〉 的媒介 ，損壞快速生長 、分裂中的神經細胞 〈圖一及二〉。我們也曾經以加熱 方式去活化的日本腦炎病毒感染N18細胞 ，發現並無法損壞快速生長 、分 裂中的神經細胞，此一結果暗示，外套膜構形正確的日本腦炎病毒顆粒與細 胞表面上未知的接受器結合，是誘發細胞內死亡訊息傳遞的重要因素之一。 除此之外， UV照射日本腦炎病毒顆粒的過程中是否導致大量較穩定的自由 基產生 ，繼而直接損壞細胞膜上的蛋白質或脂質 ，造成神經細胞死亡 。然而， 37 UV-JEV所造成的細胞死亡現象只發生在 快速生長、分裂中的神經細胞，而 在生長、分裂停止的神經細胞卻不會發生〈圖二 B 〉，此結果顯示，UV-JEV 藉由自由基直接損壞細胞膜上的蛋白質或脂質的理論可能並非 UV-JEV 造成 細胞死亡的原因。自由基的生成可藉由不同途徑以化學或生物方式產生，前 者主要是透過高能量放射線造成的分子化學鍵斷裂 ，例如蛋白質以加瑪 〈γ〉 射線或 UV照射 ，後者大多發生在生物體內以電子轉移反應 〈electron transfer reaction 〉機制生成 (Hawkins and Davies, 2001) 。為 了區別生成的自由基並非 來自於 UV照射細胞蛋白質的結果，本實驗所用的日本腦炎病毒顆粒在經過 UV照射之前皆經過進一步處理 、純化 ，以UV-JEV 與 UV照射過的細胞培養 液〈培養過蚊子細胞 (C6/36)的細胞培養液 , UV-medium 〉處理N18 細胞，觀 察到 UV-JEV可以損壞快速生長、分裂中的神經細胞，而 UV-medium卻不 會 ，因此我們相信此種細胞死亡的特徵應該是 JEV專一性的現象 。在整個實 驗過程中我們也發現 UV-JEV感染所造成的 N18細胞死亡可被具有複製及轉 譯病毒蛋白質能力的 JEV所拮抗 、抑制 ，我們認為此現象的機制有可能有二: 〈1 〉JEV 與 UV-JEV競爭細胞表面的接受體的結果 。〈2 〉JEV感染能夠傳遞 細胞存活訊息所導致。 〈3 〉JEV感染能誘發細胞表現抗氧化物質。至於何者 機制，仍有待進一步的證實。因此，JEV感染所造成的細胞壓力或病變，除 了過去報導可能源於病