利用CODEHOP设计简并引物克隆镰刀菌果胶酶 - 河北农业大学学报.PDF

第 卷第 期 河北农业大学学报 ３５ ５ Ｖｏｌ．３５Ｎｏ．５ 年 月 ＪＯＵＲＮＡＬＯＦＡＧＲＩＣＵＬＴＵＲＡＬ ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ ＯＦ ＨＥＢＥＩ 　 　 　 　 　 ２０１２ ９ Ｓｅ ．２ ０１２ 　　　 ｐ 　　　 　 　 文章编号： （ ） １０００１５７３２０１２０５００５７０６ － － － 利用ＣＯＤＥＨＯＰ设计简并引物克隆镰刀菌 果胶酶基因片段 ， ， ， ， ， 邹庆甲 王树桐 王 娟 王亚南 胡同乐 曹克强 　 　 　 　 　 　 （ ， ） 河北农业大学植物保护学院 河北保定 ０７１００１ ： （ ） 摘要 利用 ＣＯＤＥＨＯＰ Ｃｏｎｓｅｎｓｕｓｄｅｅｎｅｒａｔｅｈ ｂｒｉｄｏｌｉｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｒｉｍｅｒｓ设计真菌果胶酶基因片段的简并 － 　 　 　 ｇ ｙ ｇ ｐ ， ， （ ） ， 引物 并对设计的多对引物进行筛选 比较了普通ＰＣＲ和 ＴｏｕｃｈｄｏｗｎＰＣＲ ＴＤ ＰＣＲ 程序的扩增效果 并对产 － － 、 。 ： ， ， 物进行了测序 比对和分析 结果表明 利用 ＣＯＤＥＨＯＰ设计简并引物可信性强 阳性率高 能够从供试菌株中 。 。 获得与目的片段大小相近的产物 利用 ＴＤ ＰＣＲ程序扩增比普通 ＰＣＲ扩增效果好 扩增产物序列 ＢＬＡＳＴＸ － ， ， 比对和分析结果表明 产物片段编码的氨基酸序列与镰刀菌属来源的果胶酶氨基酸片段相似性均超过 ９０％ 说 明所扩增的序列即为镰刀菌果胶酶基因片段。 ： ； ； ； 关 键 词 简并引物 镰刀菌 果胶酶基因 降落ＰＣＲ 　 　 中图分类号： 文献标志码： Ｓ４３２．４ Ａ Ｔｈｅｃｌｏｎｉｎ ｏｆＦｕｓａｒｉｕｍ ｏｌ ａｌａｃｔｕｒｏｎａｓｅ ｅｎｅｆｒａｍｅｎｔｓ