仪器流式细胞仪(术)2010.ppt

Tube Collection Device SP cell的检测与分选 SP细胞的发现 1996年Goodell等在用DNA染料Hoechst33342为干细胞染色并进行流式细胞仪分析时，发现有一群染色偏低，和其它大部分细胞不一样的细胞群体，遂命名为side population cells(SP)，中文名为侧群细胞，也有学者称其为边缘群细胞。 SP细胞 成体干细胞研究中，SP细胞是近年来在多种不同种属的哺乳动物组织中被发现的细胞群体，是另一类主要在骨髓和肌肉中发现的多潜能干细胞，具有向不同于本身起源组织的多种细胞类型分化的能力 MCF-7细胞用Hoechst33342染色后，用BD流式细胞仪检测，UV激光激发样品，探测FL4(红)、FL5(蓝)两个通道信号。 与维拉帕米处理组(左)相比，实验组(右)可明显检测到一群低染细胞，这就是SP cell(侧群细胞)。（此图为本室真实检测结果，如转载请注明） 上图为胰腺癌SP细胞的检测与分选(省人医普外题) 上图为产后不同时间小鼠子宫内膜细胞SP细胞 分析(省人医妇产科课题) 本室检测与分选SP细胞的优势 分选纯度高 FACS VANTAGE SE 分选SP细胞可达95%以上纯度，新购置的ARIA II SORP可达99%以上 分选速度快 FACS VANTAGE SE 分选SP细胞可达8000-10000/秒，新购置的ARIA II SORP可达70000/秒。 Thank you! FCM在血液学中的应用 FCM通过对外周血或骨髓细胞表面抗原和DNA的检测，对各种血液病的诊断、预后起着举足轻重的作用 FCM在血液学中的应用 白血病的诊断和治疗 各种血细胞系统都具有其独特的抗原，当形态学检查难以区别时，免疫表型、参数对各种白血病的诊断和鉴别诊断有决定性的作用 FCM在血液学中的应用 各系血细胞的独特抗原 干系：CD34 髓系：CD13、CD14 B系：CD10、CD19、CD20 T系：CD2、CD3、CD5、CD7 FCM在血液学中的应用 移植配型 FCM测定CD34，HLA-DR，CD33成为干细胞移植技术的重要手段 FCM在血液学中的应用 阵发性血红蛋白尿症（PNH） PNH是一种获得性克隆基因失调，CD59、CD55抗原表达减低是该病的一个特征。临床表现是血管内皮出血和再栓塞。 PNH的诊断 FCM在血液学中的应用 网织红细胞的测定 网织红细胞的计数是反映骨髓造血功能的重要指标。FCM通过某些荧光染料与红细胞中的RNA结合，定量测定网织红细胞中的RNA，得到网织红细胞占成熟红细胞的百分比。 FCM在血液学中的应用 临床应用 干细胞移植术后恢复的判断 贫血的治疗检测 肿瘤病化疗对骨髓的抑制状况 FCM在血液学中的应用 血小板功能检测 血小板活化时其质膜糖蛋白较其静止时发生着显著改变。FCM可通过单抗的免疫荧光标记血小板膜糖蛋白、CD36、CD41、CD61、CD62p、CD63、PAC-1。监测血小板功能及活化状态。 FCM在血液学中的应用 临床应用 先天性或获得性血小板疾病。如：血小板无力症，巨血小板综合症，骨髓增生性疾病 血栓栓塞性疾病：心肌梗死、脑栓塞、心绞痛、短暂性脑缺血发作等 血小板减少性紫癜 评价血小板活化程度 抗血小板药物治疗检测 FCM在血液学中的应用 FCM在药理学中的应用 从FCM DNA直方图变化分析，研究化疗药物的作用机制和位点，是否周期特异性或时相特异性，直观了解化疗药物对癌细胞动力学干扰和影响。 FCM在药理学中的应用 用药 前 用药后 FCM在生殖医学中的应用 FCM 在精子发生学，睾丸瘤，不育症，药物对精细胞的干扰等研究都可进行定量研究。特别是可以进行X、Y精子的分选 FCM在生殖医学中的应用 FCM在生殖医学中的应用 FCM在生殖医学中的应用 FCM在生殖医学中的应用 FCM在微生物学中的应用 Light scatter signature of a mixture of B.subtilis spores (BG) and E.coli cells. BG doublets BG spores E.coli cells debris debris E.coli BG doublets ? log FS log FS log SS Count FCM在寄生虫学中的应用 细胞分选 FCM可在高速分析细胞的同时，根据细胞的生物学特性，将细胞群体中特殊的细胞亚群分选出来，进行进一步形态学、细胞功能及分子生物学等研究。 FACSVantage SE流式细胞仪分选系统 4