实验出凝血检查-上海交通大学医学院医学检验系.PPT

实验 出凝血检查 上海交通大学医学院 余文红 （一）血标本的采取应注意的问题 1. PT、APTT凝血实验检查均使用静脉血。采血人员应技术熟练，以防止组织损伤，外源性凝血因子进入针管。 2．一般血液采集，进入容器至进行实验所用的时间越短，所分析的凝血因子被保护得越好。从输液三通管取出血的做法不可取。 3．取血时病人应松驰，环境温暖，防止静脉挛缩，止血带的压力要尽可能小，取血时，拉针栓的速度要慢而均匀，使血液平稳地进入注射器，防止气泡的产生。 4．一旦取样完毕，立即与抗凝剂充分混合，一般提倡使用真空采血管。 5．用硅化玻璃或塑料注射器采血。考虑结果的精确性，应将试管刻度的可能误差控制在既定体积的10%以内。 6.采血后标本在低温保存且在一定时间范围内。  7. 国际血液学标准化委员会（ICSH）、国际血栓与止血委员会（ICTH）推荐使用3.2g/dl（含2H2O）或0.109mol/L的枸橼酸钠作为凝血因子检查的抗凝剂。 8.抗凝剂在血标本的绝对含量可改变血浆中钙离子浓度，进而影响试验结果，因此应根据患者红细胞比例（Hct）状况随时调整抗凝剂用量。 （二）应用试剂应注意的问题 1.组织凝血活酶工作制剂的国际敏感指数（ISI），为了使不同敏感性的组织凝血活酶在检测PT中能得到同样的结果，必须要制定一个共同的敏感性指标。 2.凝血活酶和部分活化凝血活酶的使用步骤必须严格按照说明书进行。通常在使用前必须充分混匀试剂，以使微粒重新均匀悬浮于液体中。 3.试剂准备过程中应该使用去离子水。 4.正常对照血浆通常将多份健康人血标本混在一起，以弥补个体误差。 （三）使用实验器材应注意的问题 1. 玻璃器皿的要求：贮存和测试时应选用干净、没有划痕的试管。 2. 温度的要求：人工测定终点法要求水浴箱的温度必须保持在（37±1）℃，并且周围照明设备要好，便于读取终点。 （四）实验操作应注意的问题 1. 许多试验误差都来源于技术的错误。在实验技术、试剂、温度及pH值上很微小的变化都会导致试验结果明显的变化。 2. 手工法PT或试管法CT检查时，倾斜试管动作一定要轻，角度要小，以减少血液与管壁的接触面积。 3. 血液凝固主要是酶催化的反应，所以实验过程中要严格控制理想的pH环境和溶液的离子强度。 4. 试验结果准确还取决于所用的反应物的量、加入顺序和不同反应物的孵育时间。 5. APTT、PT需乏血小板血浆。 　 6. 试验前检查血浆是否有溶血、黄疸、脂血和出现凝块。 7. 报告方式： 以PT的秒（s）数报告。 以患者PT（s）/正常对照（s）的比（PTR）报告。 在口服药物治疗监控时以INR报告。 ICSH规定，不再用百分比（活动度）报告。 APTT以秒报告。 1987年WHO提出PT值用INR（international normalized ratio国际标准化比值）作为PT结果报告形式，并用以作为抗凝治疗监护的指标。 INR=［病人PT（s）/正常人平均PT（s）］ISI PTR=受检者PT（s）/正常对照PT（s） INR=PTRISI ISI：国际敏感指数（international sensitivity index）1～1.9 CT、PT、APTT、 RT、Fg、TT 凝 血 时 间 测 定 C T 目的：掌握玻璃试管法凝血时间测定的方法 原理： 离体静脉血与玻璃表面接触后，血中XII因子活化并启动内源性凝血途径，最终生成纤维蛋白而使血液凝固所需的时间。 器材： 6mm直径玻璃试管3支 静脉采血器材 37℃恒温浴箱 秒表 步骤：3支试管各1ml血，每隔0.5min倾斜，第一管计时后，立即观察第二、三管并计时，直至血液凝固。 结果判断：从血液刚进入注射器至第3管凝固所需时间即为凝血时间。 正常参考值：4～12分钟 报告方式：CT X.Xmin（玻璃试管法） 注意事项： 试管应洁净干燥，抽血应“一针见血”且血液中不含泡沫。 温度恒定为37℃，倾斜试管角度应在30°左右。 评价： 凝血时间曾用玻片法测定，但由于毛细血管采血，易混入组织液而使凝血时间正常，属于淘汰方法。 延长：严重内源性凝血途径凝血因子有缺陷；血中抗凝物质增多；肝素治疗 缩短：高凝状态（DIC早期） 凝 血 酶 原 时 间 P T 原理： 在乏血小板血浆中加入组织因子和钙离子（钙凝血活酶）后，血浆发生凝固的时间即为凝血酶原时间（PT）。