高效液相色谱操作步骤1概要1
高效液相色谱; 1.概述-发展;色谱法于二十世纪五十年代之后飞速发展,并发展出一个独立的三级学科-色谱学。
1952年英国科学家阿切尔·马丁、理查德·辛格因发明了分配色谱法而共同获得诺贝尔化学奖,此外色谱分析方法还在12项获得诺贝尔化学奖的研究工作中起到关键作用。; 1.概述-色谱分离的特点;色谱分离的几个概念
所有的色谱分离操作均分为:装柱、上样、层析、洗脱。
其中的固定不动的相,称为固定相;
携带试样混合物流过此固定相的流体,称为流动相;
作为流动相的液体或气体,称为洗脱剂;
洗脱时从柱中流出的溶液,称为洗脱液;
加入洗脱剂使各组分分层的操作,叫层析,也叫展开。;分离原理;常用的固定相(色谱柱填料);硅胶:应用广泛,适合各类成分
氧化铝:主要用于碱性或中性亲脂性成分,如生物碱、甾体、萜类等
活性炭:用于水溶性氨基酸、糖类及苷类
聚酰胺:主用于酚类、醌类如黄酮类、蒽醌类及鞣质等成分;;吸附色谱;;;离子交换树脂法;大孔吸附树脂;分配色谱;正相色谱:固定相为极性,流动相为非极性。
反相色谱:固定相为非极性,流动相为极性。用的最多,约占60~70%。
;高效液相色谱仪的应用;色谱柱简介;化学键合相;流动相;流动相的选择原则;色谱分离过程理论基础;柱效率
实际工作中,塔板数的计算用下列公式:
而理论塔板数的计算公式为:
n = L / H
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